| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| ·HBV的分子生物学 | 第11-14页 |
| ·国内乙肝疫苗的研发方向及乙肝疫苗市场分析 | 第14-15页 |
| ·RNAI技术在HBV防治中的应用 | 第15-16页 |
| ·本论文的研究意义和技术路径 | 第16-22页 |
| ·本论文的研究意义 | 第16-18页 |
| ·本文的创新性 | 第18页 |
| ·技术路线 | 第18-22页 |
| 第二章 PCDNA6-HAAT-EGFP重组质粒的构建与HAAT启动子的肝组织特异性验证 | 第22-33页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·质粒和菌株 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·溶液配制 | 第23-26页 |
| ·细菌培养基 | 第23-24页 |
| ·质粒提取所用溶液 | 第24-25页 |
| ·琼脂糖电泳缓冲液 | 第25页 |
| ·转化缓冲液 | 第25页 |
| ·其他溶液 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-30页 |
| ·hAAT的PCR扩增及酶切 | 第26-27页 |
| ·PCR产物和pcDNA6-CMV-EGFP载体的双酶切与纯化 | 第27页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第27页 |
| ·重组质粒的转化与筛选 | 第27-29页 |
| ·重组质粒PCDNA6-HAAT-EGFP的鉴定 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pcDNA6-hAAT-EGFP的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒PCR扩增鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pcDNA6-hAAT-EGFP测序鉴定 | 第31页 |
| ·小结 | 第31-33页 |
| 第三章 肝脏特异性SIRNA表达载体PCDNA6-HAAT-SIEGFP的构建 | 第33-45页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·溶液配制 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-41页 |
| ·siRNA表达单元的设计与构建 | 第34-39页 |
| ·pcDNA6-CMV-EGFP分步酶切 | 第39-40页 |
| ·ApoE-hAAT-siEGFP的分步酶切 | 第40页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第40页 |
| ·重组质粒转染大肠杆菌 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-43页 |
| ·重组质粒的PCR扩增鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第42页 |
| ·重组质粒的物理图谱 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-45页 |
| 第四章 重组载体PCDNA6-HAAT-EGFP在三种组织癌细胞中的表达 | 第45-51页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·细胞系 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·溶液配制 | 第45-47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·质粒的大量制备 | 第47-48页 |
| ·质粒的纯化 | 第48页 |
| ·细胞培养 | 第48页 |
| ·细胞的转染(脂质体法) | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-51页 |
| 第五章 PCDNA6-HAAT-SIEGFP在细胞系中的表达 | 第51-61页 |
| ·实验材料 | 第51-56页 |
| ·细胞系 | 第51页 |
| ·主要试剂(同第四章的不再列出) | 第51-52页 |
| ·主要仪器(同第四章的不再列出) | 第52页 |
| ·溶液配制(同第四章) | 第52-56页 |
| ·实验方法 | 第56-61页 |
| ·质粒的大量制备(同第四章) | 第56页 |
| ·质粒的纯化(同第四章) | 第56页 |
| ·细胞培养(同第四章) | 第56页 |
| ·细胞的转染(脂质体法) (同第四章) | 第56页 |
| ·表达产物的检测Western blot | 第56-61页 |
| 结论与展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 附录 | 第66-72页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
