| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 金葡菌及其肠毒素的检测方法的研究进展 | 第13-18页 |
| ·金葡菌检测的研究进展 | 第13-15页 |
| ·分子生物学方法 | 第14-15页 |
| ·金葡菌肠毒素检测的研究进展 | 第15-18页 |
| ·生物学检测 | 第15页 |
| ·传统免疫分析法 | 第15-16页 |
| ·标记免疫分析法 | 第16-17页 |
| ·生物传感器技术 | 第17-18页 |
| ·超抗原技术 | 第18页 |
| 2 基因工程与发酵工程进展 | 第18-19页 |
| ·基因工程 | 第18-19页 |
| ·发酵工程 | 第19页 |
| 3 生物优化方法在发酵过程中的应用 | 第19-21页 |
| ·非统计优化技术 | 第19-20页 |
| ·统计优化技术 | 第20-21页 |
| ·Placket-Burman设计法 | 第20页 |
| ·部分因子设计法 | 第20-21页 |
| ·中心组合设计法 | 第21页 |
| ·Box-Behnken设计法 | 第21页 |
| 4 本课题研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 SEA基因工程菌的构建与蛋白的表达纯化 | 第23-34页 |
| 1 引言 | 第23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-30页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器与设备 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| ·金葡菌基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·SEA基因引物设计与PCR扩增 | 第25页 |
| ·目的基因的亚克隆 | 第25-26页 |
| ·重组SEA表达质粒的构建与鉴定 | 第26页 |
| ·SEA融合蛋白的表达和破碎 | 第26-27页 |
| ·Ni-亲和层析柱纯化rSEA | 第27-28页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·透析除盐 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-32页 |
| ·SEA基因的扩增 | 第30页 |
| ·重组表达质粒的构建及酶切验证 | 第30-31页 |
| ·测序结果 | 第31页 |
| ·rSEA的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·rSEA的亲和层析纯化 | 第32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 产金葡菌肠毒素A工程菌的发酵条件研究 | 第34-47页 |
| 1 引言 | 第34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-38页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·菌株和抗血清 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器与设备 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·培养条件 | 第35-36页 |
| ·间接竞争ELISA检测rSEA方法的建立 | 第36-38页 |
| ·乳糖诱导最佳浓度的确定 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-45页 |
| ·间接非竞争ELISA法测定抗血清的效价 | 第38-39页 |
| ·抗SEA抗血清的间接竞争ELISA灵敏度分析 | 第39-40页 |
| ·包被抗原和抗血清最佳工作浓度的选择 | 第39页 |
| ·间接竞争ELISA方法标准曲线的建立 | 第39-40页 |
| ·接种量的影响 | 第40-41页 |
| ·pH对目的蛋白产量的影响 | 第41页 |
| ·温度对目的蛋白产量的影响 | 第41-42页 |
| ·诱导时机影响 | 第42-43页 |
| ·诱导后培养时间对表达的影响 | 第43页 |
| ·乳糖诱导 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 产金葡菌肠毒素A工程菌的发酵培养基优化 | 第47-55页 |
| 1 引言 | 第47页 |
| 2 材料和方法 | 第47-49页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·菌种 | 第47-48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·主要仪器与设备 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-49页 |
| ·培养条件 | 第48页 |
| ·间接竞争ELISA检测rSEA方法 | 第48页 |
| ·培养基优化 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-54页 |
| ·Plackett-Burman设计法 | 第49-50页 |
| ·最陡爬坡试验设计法 | 第50-51页 |
| ·Box-Behnke试验设计筛选重要因素的最优水平 | 第51-53页 |
| ·响应面分析及最佳培养基成分确定 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 结论与展望 | 第55-57页 |
| 1 结论 | 第55-56页 |
| ·SEA基因工程菌的构建与蛋白的表达纯化 | 第55页 |
| ·产金葡菌肠毒素A工程菌的发酵条件研究 | 第55页 |
| ·产金葡菌肠毒素A工程菌的发酵培养基优化 | 第55-56页 |
| 2 展望 | 第56-57页 |
| ·对包涵体变性复性条件进行优化 | 第56页 |
| ·对纯化后的rSEA进行结构、功能分析及生物活性鉴定 | 第56页 |
| ·金葡菌多联融合毒素工程菌的构建 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 致谢 | 第67页 |