| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-19页 |
| 1.1 紫杉醇及其药源 | 第12-14页 |
| 1.1.1 植物中提取 | 第12页 |
| 1.1.2 化学合成及半合成 | 第12-13页 |
| 1.1.3 植物细胞悬浮培养 | 第13页 |
| 1.1.4 微生物发酵培养 | 第13-14页 |
| 1.1.5 基因工程选育紫杉醇高产体系 | 第14页 |
| 1.2 产紫杉醇内生菌的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.1 产紫杉醇内生真菌 | 第14-15页 |
| 1.2.2 产紫杉醇内生细菌 | 第15页 |
| 1.3 提高内生菌紫杉醇产量的途径 | 第15-17页 |
| 1.3.1 发酵条件的优化 | 第15-16页 |
| 1.3.2 添加影响紫杉醇合成的物质 | 第16页 |
| 1.3.3 通过诱变技术改良菌种 | 第16-17页 |
| 1.3.4 构建紫杉醇高产基因工程菌株 | 第17页 |
| 1.4 真菌中紫杉醇合成相关酶及基因的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.5 本研究的内容、目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 紫杉醇合成相关基因的克隆及生物信息学分析 | 第19-34页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 材料 | 第19-20页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.2.2 试剂及培养基 | 第19-20页 |
| 2.2.3 仪器 | 第20页 |
| 2.3 方法 | 第20-23页 |
| 2.3.1 紫杉醇合成相关基因的筛选 | 第20-21页 |
| 2.3.2 枝霉MD2基因组DNA的提取 | 第21页 |
| 2.3.3 候选基因DNA全长序列的克隆 | 第21-23页 |
| 2.3.4 候选基因的生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.4 结果 | 第23-33页 |
| 2.4.1 候选基因的筛选及DNA全长序列的克隆 | 第23-26页 |
| 2.4.2 候选基因的生物信息学分析 | 第26-33页 |
| 2.5 本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 候选基因A00981的过表达分析 | 第34-52页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 材料 | 第34-36页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.2.2 试剂及培养基 | 第34-36页 |
| 3.2.3 仪器 | 第36页 |
| 3.3 方法 | 第36-42页 |
| 3.3.1 农杆菌介导的枝霉MD2遗传转化 | 第36-38页 |
| 3.3.2 候选基因过表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.3 A00981-转基因菌株的筛选及验证 | 第39页 |
| 3.3.4 Southern blot检测 | 第39-40页 |
| 3.3.5 QRT-PCR检测 | 第40-41页 |
| 3.3.6 紫杉烷类的提取及HPLC检测 | 第41-42页 |
| 3.4 结果 | 第42-50页 |
| 3.4.1 农杆菌介导的枝霉MD2遗传转化体系 | 第42-43页 |
| 3.4.2 候选基因A00981过表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.4.3 A00981-转基因菌株的筛选及验证 | 第44-46页 |
| 3.4.4 A00981-转基因菌株的分子生物学分析 | 第46-47页 |
| 3.4.5 A00981-转基因菌株中紫杉烷类代谢产物的分析 | 第47-50页 |
| 3.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第四章 候选基因A03231的过表达分析 | 第52-59页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 材料 | 第52页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第52页 |
| 4.2.2 试剂及培养基 | 第52页 |
| 4.2.3 仪器 | 第52页 |
| 4.3 方法 | 第52-53页 |
| 4.3.1 候选基因过表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 4.3.2 A03231-转基因菌株的筛选及验证 | 第53页 |
| 4.3.3 Southern blot及QRT-PCR检测 | 第53页 |
| 4.3.4 紫杉烷类的提取及HPLC检测 | 第53页 |
| 4.4 结果 | 第53-58页 |
| 4.4.1 候选基因A03231过表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 4.4.2 A03231-转基因菌株的筛选及验证 | 第54-55页 |
| 4.4.3 A03231-转基因菌株的分子生物学分析 | 第55-56页 |
| 4.4.4 A03231-转基因菌株中紫杉醇等代谢产物的分析 | 第56-58页 |
| 4.5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第五章 总结与展望 | 第59-61页 |
| 5.1 总结 | 第59页 |
| 5.2 本研究创新点 | 第59-60页 |
| 5.3 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 硕士学位期间发表学术论文目录 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
