| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-25页 |
| 1.1 天然产物是新药发现的主要源泉 | 第10-11页 |
| 1.2 天然产物的分类及其生物合成机制 | 第11-16页 |
| 1.2.1 聚酮 | 第11-13页 |
| 1.2.2 非核糖体肽 | 第13页 |
| 1.2.3 核糖体多肽 | 第13-16页 |
| 1.3 羊毛硫肽类化合物的生物合成机制 | 第16-19页 |
| 1.3.1 羊毛硫肽类化合物的分类 | 第17-18页 |
| 1.3.2 羊毛硫肽的生物合成途径 | 第18-19页 |
| 1.4 利用基因组挖掘技术发现微生物天然产物 | 第19-24页 |
| 1.4.1 基因组挖掘技术的概念 | 第19-20页 |
| 1.4.2 微生物天然产物基因组挖掘发现的技术路线 | 第20-23页 |
| 1.4.3 微生物天然产物基因组挖掘的成果 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-32页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 实验所用引物 | 第25-26页 |
| 2.1.3 试剂和溶剂 | 第26-28页 |
| 2.1.4 培养基 | 第28-30页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第30-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-41页 |
| 2.2.1 Inoue超级感受态大肠杆菌E.coli的制备 | 第32页 |
| 2.2.2 小提质粒(碱裂解法) | 第32-33页 |
| 2.2.3 大肠杆菌E.coli质粒转化 | 第33页 |
| 2.2.4 S.thermolilacinus SPC6及突变株孢子的生长和回收 | 第33页 |
| 2.2.5 链霉菌总DNA提取 | 第33-34页 |
| 2.2.6 链霉菌基因的PCR扩增 | 第34页 |
| 2.2.7 体外三片段重组构建敲除质粒 | 第34-36页 |
| 2.2.8 重组质粒双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.9 属间接合转移 | 第37页 |
| 2.2.10 突变体筛选和验证 | 第37-39页 |
| 2.2.11 S.thermolilacinus SPC6菌株发酵 | 第39页 |
| 2.2.12 S.thermolilacinus SPC6发酵活性产物提取和分析 | 第39-40页 |
| 2.2.13 S.thermolilacinus SPC6野生型和突变株发酵产物活性检测 | 第40-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-50页 |
| 3.1 S.thermolilacinus SPC6基因组生物信息学分析 | 第41-42页 |
| 3.2 S2C8基因簇敲除质粒的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.1 扩增S2C8左右同源臂及线性化载体 | 第42-43页 |
| 3.2.2 体外三片段重组 | 第43-44页 |
| 3.2.3 质粒双酶切验证 | 第44页 |
| 3.3 S2C8基因簇敲除突变株的获得 | 第44-47页 |
| 3.3.1 属间接合转移 | 第44-45页 |
| 3.3.2 突变株筛选 | 第45-47页 |
| 3.4 S.thermolilacinus SPC6野生型和突变株发酵活性检测 | 第47-50页 |
| 3.4.1 S.thermolilacinus SPC6发酵测活结果 | 第47-48页 |
| 3.4.2 S.thermolilacinus SPC6突变株发酵测活结果 | 第48-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 结论与展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 在学期间的研究成果 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
