| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第16-33页 |
| 第一章 口腔黏膜上皮细胞研究进展 | 第16-26页 |
| 1.1 口腔黏膜的结构和功能 | 第16-17页 |
| 1.2 口腔黏膜上皮细胞和免疫 | 第17-20页 |
| 1.3 口腔黏膜上皮细胞和疾病 | 第20页 |
| 1.4 口腔黏膜上皮细胞的角蛋白表达特异性 | 第20-22页 |
| 1.4.1 角蛋白的分子生物学 | 第20-21页 |
| 1.4.2 角蛋白表达具有组织和细胞特异性 | 第21页 |
| 1.4.3 口腔黏膜上皮细胞中角蛋白的表达 | 第21-22页 |
| 1.5 口腔黏膜上皮细胞的分离 | 第22页 |
| 1.6 口腔黏膜上皮细胞的培养 | 第22-24页 |
| 1.6.1 口腔黏膜上皮细胞的原代培养方法 | 第22-23页 |
| 1.6.2 口腔黏膜上皮细胞的培养条件 | 第23页 |
| 1.6.3 口腔黏膜上皮细胞体外培养中的污染问题 | 第23-24页 |
| 1.6.4 口腔黏膜上皮细胞培养环境 | 第24页 |
| 1.7 口腔黏膜上皮细胞的生物学特性 | 第24页 |
| 1.7.1 细胞鉴定 | 第24页 |
| 1.7.2 克隆形成率 | 第24页 |
| 1.7.3 细胞生长曲线的测定 | 第24页 |
| 1.8 口腔黏膜上皮细胞的组织工程应用 | 第24-25页 |
| 1.9 展望 | 第25-26页 |
| 第二章 端粒及端粒酶与细胞永生化研究进展 | 第26-33页 |
| 2.1 端粒的结构和功能 | 第26-27页 |
| 2.1.1 端粒结构 | 第26-27页 |
| 2.1.2 端粒功能 | 第27页 |
| 2.2 端粒酶的结构和功能 | 第27-28页 |
| 2.3 细胞的永生化 | 第28-31页 |
| 2.3.1 端粒酶使细胞永生化机制 | 第28-29页 |
| 2.3.2 端粒酶永生化细胞研究进展 | 第29-31页 |
| 2.4 衰老和癌症的端粒-端粒酶理论 | 第31-32页 |
| 2.5 展望 | 第32-33页 |
| 试验研究 | 第33-79页 |
| 第三章 新生仔猪口腔黏膜上皮细胞的分离与培养 | 第33-46页 |
| 3.1 材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 试验用动物 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第34页 |
| 3.2 方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 组织采集 | 第34页 |
| 3.2.2 主要细胞培养液的配置 | 第34-35页 |
| 3.2.3 仔猪口腔黏膜上皮细胞的原代培养 | 第35-36页 |
| 3.2.4 仔猪口腔黏膜上皮细胞传代培养 | 第36页 |
| 3.2.5 仔猪口腔黏膜上皮细胞的纯化 | 第36页 |
| 3.2.6 仔猪口腔黏膜上皮细胞的观察与鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3 结果 | 第37-43页 |
| 3.3.1 原代细胞的培养 | 第37-39页 |
| 3.3.2 POMECs分离培养方法的比较 | 第39-40页 |
| 3.3.3 仔猪口腔黏膜上皮细胞的传代培养 | 第40-41页 |
| 3.3.4 仔猪口腔黏膜上皮细胞的形态学特征 | 第41页 |
| 3.3.5 仔猪口腔黏膜上皮细胞鉴定 | 第41页 |
| 3.3.6 仔猪口腔黏膜上皮细胞生长曲线 | 第41页 |
| 3.3.7 仔猪口腔黏膜上皮细胞周期 | 第41-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 3.5 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 hTERT介导的永生化猪口腔黏膜上皮细胞系的建立 | 第46-59页 |
| 4.1 材料 | 第46-47页 |
| 4.1.1 细胞、质粒和主要试剂 | 第46页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第46-47页 |
| 4.2 方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 细菌培养液的配置 | 第47页 |
| 4.2.2 pCI-neo-hTERT质粒的转染 | 第47页 |
| 4.2.3 端粒酶活性检测 | 第47页 |
| 4.2.4 Western blot检测转染细胞中外源性hTERT基因的表达 | 第47页 |
| 4.2.5 hTERT-POMECs的细胞生长曲线 | 第47页 |
| 4.2.6 细胞生长周期检测 | 第47-48页 |
| 4.2.7 hTERT-POMECs细胞标志分子的间接免疫荧光鉴定 | 第48页 |
| 4.2.8 PCR检测hTERT-POMECs中免疫相关基因的表达 | 第48页 |
| 4.2.9 POMECs非显带染色体核型分析 | 第48页 |
| 4.2.10 裸鼠致瘤性试验 | 第48-49页 |
| 4.3 结果 | 第49-57页 |
| 4.3.1 pCI-neo-hTERT质粒浓度和纯度测定 | 第49页 |
| 4.3.2 pCI-neo-hTERT质粒鉴定 | 第49页 |
| 4.3.3 POMECs G418最佳筛选浓度的确定 | 第49页 |
| 4.3.4 pCI-neo-hTERT转染后筛选永生化细胞系 | 第49-50页 |
| 4.3.5 hTERT基因成功表达于hTERT-POMECs中 | 第50-51页 |
| 4.3.6 hTERT-POMECs的细胞生长曲线 | 第51-52页 |
| 4.3.7 hTERT-POMECs的细胞生长周期 | 第52-53页 |
| 4.3.8 hTERT-POMECs的免疫荧光鉴定 | 第53页 |
| 4.3.9 hTERT-POMECs具有原代POMECs的基本生物学功能 | 第53-55页 |
| 4.3.10 hTERT-POMECs细胞核型分析 | 第55页 |
| 4.3.11 hTERT-POMECs的致瘤性试验 | 第55-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-58页 |
| 4.5 小结 | 第58-59页 |
| 第五章 自发永生化猪口腔黏膜上皮细胞系的筛选与鉴定 | 第59-66页 |
| 5.1 材料 | 第59页 |
| 5.2 方法 | 第59页 |
| 5.2.1 Sp-POMECs的获得 | 第59页 |
| 5.2.2 Sp-POMECs的细胞生长曲线 | 第59页 |
| 5.2.3 Sp-POMECs细胞标志分子的间接免疫荧光鉴定 | 第59页 |
| 5.2.4 Sp-POMECs的核型分析和致瘤性分析 | 第59页 |
| 5.3 结果 | 第59-64页 |
| 5.3.1 Sp-POMECs的生长及其细胞形态 | 第59-60页 |
| 5.3.2 Sp-POMECs的细胞生长曲线 | 第60页 |
| 5.3.3 Sp-POMECs的鉴定 | 第60-63页 |
| 5.3.5 Sp-POMECs的核型分析 | 第63页 |
| 5.3.6 Sp-POMECs的致瘤性分析 | 第63-64页 |
| 5.4 讨论 | 第64-65页 |
| 5.5 小结 | 第65-66页 |
| 第六章 猪圆环病毒2型和口蹄疫病毒在POMECs中的增殖特性 | 第66-79页 |
| 6.1 材料 | 第67页 |
| 6.1.1 毒株和细胞 | 第67页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第67页 |
| 6.1.3 主要仪器设备 | 第67页 |
| 6.2 方法 | 第67-69页 |
| 6.2.1 细胞准备和病毒接种 | 第67页 |
| 6.2.2 免疫荧光 | 第67-68页 |
| 6.2.3 PCR检测PCV2 | 第68页 |
| 6.2.4 实时荧光定量PCR | 第68页 |
| 6.2.5 TCID50滴定病毒滴度 | 第68-69页 |
| 6.2.6 病毒的复制曲线 | 第69页 |
| 6.3 结果 | 第69-77页 |
| 6.3.1 PCV2感染致POMECs细胞病变 | 第69页 |
| 6.3.2 免疫荧光和PCR鉴定PCV2感染POMECs | 第69-72页 |
| 6.3.3 PCV2感染POMECs的增殖特性 | 第72-73页 |
| 6.3.4 FMDV感染致POMECs发生病变 | 第73-75页 |
| 6.3.5 FMDV感染POMECs的免疫荧光鉴定 | 第75页 |
| 6.3.6 FMDV感染POMECs的增殖特性 | 第75-77页 |
| 6.4 讨论 | 第77-78页 |
| 6.5 小结 | 第78-79页 |
| 结论 | 第79页 |
| 本论文的创新点 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-94页 |
| 附录 | 第94-98页 |
| 主要缩略词和中英文对照表(Abbreviation Index) | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 作者简介 | 第100页 |
