| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养研究进展 | 第16-38页 |
| 1.1 卵泡分化对卵母细胞体外成熟的影响 | 第16-22页 |
| 1.1.1 卵母细胞发育能力的获得 | 第16-17页 |
| 1.1.2 染色质结构和卵母细胞发育能力 | 第17-19页 |
| 1.1.3 卵泡细胞对染色质重塑过程的贡献 | 第19-22页 |
| 1.2 褪黑素调控卵母细胞和早期胚胎发育的机制研究进展 | 第22-27页 |
| 1.2.1 生殖中的自由基(ROS/RNS) | 第22页 |
| 1.2.2 氧化应激 | 第22-23页 |
| 1.2.3 氮化应激 | 第23页 |
| 1.2.4 褪黑素和ROS/RNS | 第23-25页 |
| 1.2.5 褪黑素调节合子和体外生产的氧化应激 | 第25-26页 |
| 1.2.6 褪黑素对抗硝化应激的潜在应用 | 第26-27页 |
| 1.3 牛胚胎体外培养基因表达及表观遗传分析研究进展 | 第27-35页 |
| 1.3.1 牛胚胎体外生产 | 第27-28页 |
| 1.3.2 输卵管对胚胎发育和质量的影响 | 第28-30页 |
| 1.3.3 体外胚胎质量评价 | 第30-31页 |
| 1.3.4 基因表达分析评价移植胚胎质量 | 第31-32页 |
| 1.3.5 早期环境对胚胎表型的重要性 | 第32-35页 |
| 1.4 牦牛胚胎体外培养研究进展 | 第35-37页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第37-38页 |
| 第二章 牦牛卵巢活动的关键信号调控网络分析 | 第38-48页 |
| 2.1 材料与方法 | 第38-40页 |
| 2.1.1 卵巢采集 | 第38-39页 |
| 2.1.2 切片制作与HE染色 | 第39页 |
| 2.1.3 免疫组化检测牦牛卵巢组织中VASA定位 | 第39页 |
| 2.1.4 RNA提取及转录组分析 | 第39-40页 |
| 2.1.5 qRT-PCR验证分析 | 第40页 |
| 2.1.6 数据的统计和分析 | 第40页 |
| 2.2 结果 | 第40-46页 |
| 2.2.1 母牦牛季节性排卵特征 | 第40-42页 |
| 2.2.2 冷季牦牛卵巢从窦状卵泡向成熟卵泡发育受阻 | 第42页 |
| 2.2.3 冷季牦牛卵巢窦状卵泡内颗粒细胞功能紊乱 | 第42-43页 |
| 2.2.4 RNA-Seq数据分析 | 第43页 |
| 2.2.5 牦牛卵巢基因表达的季节性影响 | 第43-45页 |
| 2.2.6 KEGG通路富集分析 | 第45页 |
| 2.2.7 暖季牦牛卵巢和冷季牦牛卵巢差异基因表达量验证 | 第45-46页 |
| 2.3 讨论 | 第46-47页 |
| 2.4 结论 | 第47-48页 |
| 第三章 褪黑素对牦牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎的影响 | 第48-67页 |
| 3.1 材料与方法 | 第48-54页 |
| 3.1.1 卵母细胞的采集与体外成熟 | 第48-49页 |
| 3.1.2 体外受精与胚胎培养 | 第49页 |
| 3.1.3 试验设计 | 第49-50页 |
| 3.1.4 卵母细胞内ROS、GSH和 DNA损伤的测定 | 第50-51页 |
| 3.1.5 卵母细胞凋亡水平的测定 | 第51页 |
| 3.1.6 卵母细胞线粒体膜电位的测定 | 第51页 |
| 3.1.7 胚胎内ROS和 GSH的测定 | 第51页 |
| 3.1.8 胚胎免疫荧光染色 | 第51-52页 |
| 3.1.9 胚胎凋亡细胞TUNEL染色分析 | 第52页 |
| 3.1.10 囊胚中相关基因qRT-PCR分析 | 第52-53页 |
| 3.1.11 数据的统计和分析 | 第53-54页 |
| 3.2 结果 | 第54-64页 |
| 3.2.1 褪黑素对牦牛卵母细胞体外成熟后胚胎发育的影响 | 第54-58页 |
| 3.2.2 褪黑素对牦牛IVF胚胎发育质量的影响 | 第58-59页 |
| 3.2.3 培养液中添加褪黑素(10~(-9)M)对牦牛IVM和 IVF胚胎发育的影响 | 第59-64页 |
| 3.3 讨论 | 第64-66页 |
| 3.4 结论 | 第66-67页 |
| 第四章 褪黑素对牦牛胚胎体外发育中H2O2 诱导氧化损伤的保护机制研究 | 第67-80页 |
| 4.1 材料与方法 | 第67-70页 |
| 4.1.1 动物及试剂 | 第67-68页 |
| 4.1.2 卵母细胞采集与体外成熟 | 第68页 |
| 4.1.3 体外受精和胚胎培养 | 第68页 |
| 4.1.4 褪黑素和H2O2 处理 | 第68页 |
| 4.1.5 胚胎凋亡细胞TUNEL染色分析 | 第68页 |
| 4.1.6 胚胎免疫荧光染色 | 第68页 |
| 4.1.7 Caspase-3 活性检测 | 第68页 |
| 4.1.8 实时荧光定量PCR | 第68-69页 |
| 4.1.9 细胞内ROS的测定 | 第69页 |
| 4.1.10 细胞内ATP含量测定 | 第69页 |
| 4.1.11 MMP检测 | 第69页 |
| 4.1.12 氧化剂及抗氧化能力测定 | 第69页 |
| 4.1.13 数据统计与分析 | 第69-70页 |
| 4.2 结果 | 第70-77页 |
| 4.2.1 褪黑素对牦牛胚胎着床前发育过程中H_2O_2诱导的氧化应激的具有保护作用 | 第70-72页 |
| 4.2.2 褪黑素对暴露于H2O2 条件下的牦牛受精卵-囊胚发育阶段的胚胎保护作用. | 第72-74页 |
| 4.2.3 褪黑素降低牦牛受精卵中H2O2 诱导的细胞内ROS水平 | 第74-75页 |
| 4.2.4 褪黑素能抑制受精卵中H2O2 诱导的线粒体功能障碍 | 第75-76页 |
| 4.2.5 褪黑素保护着床前胚胎免受抗氧化酶的氧化损伤 | 第76-77页 |
| 4.3 讨论 | 第77-79页 |
| 4.4 结论 | 第79-80页 |
| 第五章 褪黑素对牦牛体细胞核移植胚胎发育的影响 | 第80-93页 |
| 5.1 材料和方法 | 第80-83页 |
| 5.1.1 卵母细胞选择和体外成熟 | 第80页 |
| 5.1.2 体外受精与胚胎培养 | 第80页 |
| 5.1.3 供体细胞的准备与牦牛SCNT | 第80-82页 |
| 5.1.4 胚胎免疫荧光染色 | 第82页 |
| 5.1.5 细胞内ROS测定 | 第82页 |
| 5.1.6 胚胎凋亡细胞TUNEL染色分析 | 第82-83页 |
| 5.1.7 褪黑素对牦牛SCNT胚胎基因表达的影响 | 第83页 |
| 5.1.8 数据统计与分析 | 第83页 |
| 5.2 结果 | 第83-91页 |
| 5.2.1 褪黑素对牦牛SCNT胚胎的发育能力的影响 | 第83-84页 |
| 5.2.2 褪黑素对牦牛SCNT胚胎质量的影响 | 第84-86页 |
| 5.2.3 褪黑素对牦牛SCNT胚胎囊胚凋亡率的影响 | 第86-87页 |
| 5.2.4 褪黑素对牦牛SCNT胚胎ROS水平的影响 | 第87-88页 |
| 5.2.5 褪黑素对牦牛SCNT胚胎表观遗产修饰的影响 | 第88-89页 |
| 5.2.6 褪黑素对牦牛SCNT胚胎相关基因表达的影响 | 第89-91页 |
| 5.3 讨论 | 第91-92页 |
| 5.4 结论 | 第92-93页 |
| 第六章 褪黑素处理供体细胞对牦牛体细胞核移植胚胎发育的影响 | 第93-108页 |
| 6.1 材料和方法 | 第93-95页 |
| 6.1.1 卵母细胞选择和体外成熟 | 第93页 |
| 6.1.2 体外受精与胚胎培养 | 第93页 |
| 6.1.3 供体细胞的准备与体细胞核移植 | 第93页 |
| 6.1.4 褪黑素对供体细胞表观修饰的影响 | 第93-94页 |
| 6.1.5 供体细胞TUNEL染色分析 | 第94页 |
| 6.1.6 褪黑素对供体细胞相关基因的表达分析 | 第94页 |
| 6.1.7 胚胎免疫荧光染色 | 第94页 |
| 6.1.8 细胞内ROS测定 | 第94页 |
| 6.1.9 胚胎凋亡细胞TUNEL染色分析 | 第94页 |
| 6.1.10 褪黑素对牦牛SCNT胚胎基因表达的影响 | 第94-95页 |
| 6.1.11 数据统计与分析 | 第95页 |
| 6.2 结果 | 第95-106页 |
| 6.2.1 褪黑素对牦牛供体细胞增殖和凋亡的影响 | 第95-96页 |
| 6.2.2 褪黑素处理对供体细胞表观遗传的影响 | 第96-99页 |
| 6.2.3 褪黑素处理对供体细胞发育相关功能基因表达的影响 | 第99-100页 |
| 6.2.4 褪黑素处理对牦牛SCNT胚胎发育的影响 | 第100页 |
| 6.2.5 褪黑素对牦牛SCNT胚胎质量的影响 | 第100-101页 |
| 6.2.6 褪黑素对牦牛SCNT囊胚凋亡率的影响 | 第101-102页 |
| 6.2.7 褪黑素对牦牛SCNT胚胎ROS水平的影响 | 第102-103页 |
| 6.2.8 褪黑素对牦牛SCNT胚胎表观遗产修饰的影响 | 第103-104页 |
| 6.2.9 褪黑素对牦牛SCNT胚胎相关基因表达的影响 | 第104-106页 |
| 6.3 讨论 | 第106-107页 |
| 6.4 结论 | 第107-108页 |
| 全文结论 | 第108-109页 |
| 创新点 | 第109-110页 |
| 不足之处和进一步研究计划 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-125页 |
| 附录 | 第125-129页 |
| 缩略词 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 个人简历 | 第131页 |
| 攻读博士学位期间参与的科研项目及发表论文 | 第131页 |
