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胡杨PeuAZF2基因的克隆和功能分析

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
第一章 前言第12-20页
    1.1 转录因子和植物非生物胁迫第12页
    1.2 C2H2型锌指蛋白家族第12-19页
        1.2.1 C2H2型锌指蛋白的概述第13页
        1.2.2 植物C2H2型锌指蛋白的结构第13-15页
        1.2.3 C2H2型锌指蛋白的分类第15页
        1.2.4 C2H2型锌指蛋白的功能第15-18页
        1.2.5 C2H2型锌指蛋白的研究进展第18-19页
    1.3 本实验的研究意义第19-20页
第二章 材料和方法第20-46页
    2.1 基因鉴定和引物设计第20页
    2.2 总DNA提取第20-22页
        2.2.1 材料第20页
        2.2.2 仪器第20页
        2.2.3 试剂第20-21页
        2.2.4 方法(CTAB法)第21-22页
    2.3 基因扩增第22页
    2.4 琼脂糖凝胶电泳第22-23页
        2.4.1 试剂第22-23页
        2.4.2 仪器第23页
        2.4.3 方法第23页
    2.5 总RNA提取第23-25页
        2.5.1 材料第23页
        2.5.2 仪器第23-24页
        2.5.3 试剂第24页
        2.5.4 方法第24-25页
    2.6 RT-PCR第25-27页
        2.6.1 试剂第25-26页
        2.6.2 方法第26-27页
    2.7 测序第27页
    2.8 胶回收第27-28页
    2.9 克隆载体的构建第28页
    2.10 大肠杆菌感受态细胞的制备与保存第28-29页
        2.10.1 试剂第28页
        2.10.2 方法第28-29页
    2.11 克隆载体的转化第29-30页
        2.11.1 试剂第29页
        2.11.2 方法第29-30页
    2.12 菌种保存第30页
    2.13 质粒提取第30-31页
        2.13.1 克隆载体的提取第30-31页
        2.13.2 PCXSN质粒的提取第31页
    2.14 Peu AZF2过表达载体的构建第31-32页
        2.14.1 目的基因的双酶切第31页
        2.14.2 PCXSN质粒的双酶切第31-32页
        2.14.3 连接反应第32页
    2.15 PalAZF2多靶点PYLCRISPR/Cas9-DH载体的构建第32-36页
        2.15.1 菌种活化第32页
        2.15.2 质粒提取第32页
        2.15.3 sg RNA表达盒构建第32-35页
        2.15.4 pYLCRISPR/Cas9双元载体与sg RNA表达盒的酶切-连接反应第35页
        2.15.5 连接产物转化第35页
        2.15.6 pYLCRISPR/Cas9和三个sgRNA表达盒重组载体的阳性检测第35-36页
    2.16 表达载体转入农杆菌第36-37页
        2.16.1 农杆菌感受态制备第36页
        2.16.2 农杆菌转化方法第36-37页
    2.17 新疆杨叶盘侵染转化实验第37-38页
        2.17.1 材料第37页
        2.17.2 培养基配方第37页
        2.17.3 方法第37-38页
    2.18 转基因新疆杨阳性苗验证与继代培养第38-39页
        2.18.1 阳性苗验证第38-39页
        2.18.2 阳性苗继代培养第39页
    2.19 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)第39-41页
        2.19.1 模板RNA提取第39页
        2.19.2 反转录第39-40页
        2.19.3 Real-time PCR第40页
        2.19.4 实验结果分析第40-41页
    2.20 转基因新疆杨的生长情况第41页
    2.21 转基因新疆杨在盐处理下的生长表型第41-42页
        2.21.1 盐处理方法第41页
        2.21.2 生长表型统计第41-42页
    2.22 盐处理下转基因新疆杨中AZF2基因的表达第42页
    2.23 叶绿素荧光动力学参数测定第42页
        2.23.1 仪器设备第42页
        2.23.2 材料第42页
        2.23.3 测定步骤第42页
    2.24 脯氨酸含量测定第42-44页
        2.24.1 试剂和仪器第42-43页
        2.24.2 组织样品的制备第43页
        2.24.3 测定步骤第43页
        2.24.4 含量计算第43-44页
    2.25 可溶性糖含量测定第44-46页
        2.25.1 试剂和仪器第44页
        2.25.2 样品可溶性糖提取第44页
        2.25.3 测定步骤第44页
        2.25.4 含量计算第44-46页
第三章 实验结果第46-57页
    3.1 胡杨C2H2-ZFP基因家族鉴定第46页
    3.2 外显子/内含子以及motif分析第46-47页
    3.3 染色体定位第47-48页
    3.4 系统发育分析第48-49页
    3.5 杨树AZF2基因克隆与结构分析第49-51页
    3.6 杨树AZF2基因的表达模式第51-52页
    3.7 35S::Peu AZF2和palazf2转基因植株的构建第52-53页
    3.8 35S::Peu AZF2和palazf2的根生长差异第53-54页
    3.9 盐处理下表型差异和生理指标差异第54-57页
第四章 讨论第57-62页
    4.1 胡杨C2H2锌指蛋白家族的鉴定第57-58页
    4.2 杨树AZF2基因的表达模式分化第58页
    4.3 PeuAZF2与胡杨的根发育第58-59页
    4.4 PeuAZF2与胡杨的盐胁迫响应第59页
    4.5 PeuAZF2是一种正调控因子第59-62页
第五章 结论第62-64页
    5.1 主要结论第62页
    5.2 研究展望第62-64页
参考文献第64-71页
缩略词第71-72页
附录第72-76页
在读期间参与学术成果第76-77页
致谢第77页

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