中文摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
第一章 前言 | 第11-23页 |
1.1 杨树生物学特征的介绍 | 第11页 |
1.2 杨树病害的介绍 | 第11-12页 |
1.3 杨树对病原菌的防御机制 | 第12-14页 |
1.4 黄酮类化合物与杨树抗病机制的关系 | 第14-15页 |
1.5 黄酮类化合物的研究进展 | 第15-20页 |
1.5.1 黄酮类化合物的分类 | 第15页 |
1.5.2 花青素的功能特点 | 第15-16页 |
1.5.3 单宁的功能特点 | 第16页 |
1.5.4 黄酮类化合物的转录调控机制 | 第16-18页 |
1.5.5 MYB和bHLH转录因子基因家族在苯丙烷代谢通路中的作用 | 第18-20页 |
1.6 杨树转基因工程研究概况 | 第20-21页 |
1.6.1 杨树转基因工程发展近况 | 第20-21页 |
1.6.2 利用转基因技术提高杨树抗病性的研究进展 | 第21页 |
1.7 本研究的内容及技术路线 | 第21-23页 |
第二章 材料与方法 | 第23-44页 |
2.1 材料 | 第23-26页 |
2.1.1 植物材料 | 第23页 |
2.1.2 菌种、质粒 | 第23页 |
2.1.3 试剂、试剂盒 | 第23-24页 |
2.1.4 激素、抗生素 | 第24-25页 |
2.1.5 植物、细菌、真菌培养基 | 第25-26页 |
2.1.6 分析软件 | 第26页 |
2.1.7 仪器设备 | 第26页 |
2.2 方法 | 第26-44页 |
2.2.1 RT-qPCR验证Del、Ros表达量 | 第26-28页 |
2.2.2 花青素的提取 | 第28-29页 |
2.2.3 CTAB法提新疆杨DNA | 第29-30页 |
2.2.4 新疆杨总RNA提取 | 第30-31页 |
2.2.5 目的基因扩增,胶回收纯化,加“A”反应以及连接 | 第31-34页 |
2.2.6 DH5a大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第34-35页 |
2.2.7 重组质粒、连接反应产物转化DH5α感受态单细胞 | 第35-36页 |
2.2.8 扩大培养阳性单菌落并进行质粒提取 | 第36页 |
2.2.9 酶切pMD19-Ros、pCXSN-Del,并重新拼接 | 第36-38页 |
2.2.10 过表达载体转入农杆菌 | 第38-40页 |
2.2.11 新疆杨的遗传转化过表达载体转入农杆菌 | 第40-41页 |
2.2.12 转基因新疆杨的鉴定(PCR法) | 第41页 |
2.2.13 RT-qPCR验证阳性苗表达量 | 第41页 |
2.2.14 新疆杨总酚的测定 | 第41页 |
2.2.15 花青素、单宁含量的测定 | 第41-42页 |
2.2.16 新疆杨槲皮素、山奈酚的测定 | 第42-43页 |
2.2.17 新疆杨叶片DMACA的染色 | 第43页 |
2.2.18 灰霉病、溃疡病的培养和接种 | 第43-44页 |
第三章 结果与讨论 | 第44-62页 |
3.1 结果 | 第44-59页 |
3.1.1 Del、Ros在两种杨树里的表达量比较 | 第44页 |
3.1.2 两种杨树花青素含量以及抗病性的比较 | 第44-46页 |
3.1.3 Del、Ros氨基酸序列结构分析 | 第46-47页 |
3.1.4 Del、Ros基因的进化分析 | 第47-48页 |
3.1.5 新疆杨DNA提取结果并作为模板扩增Del/Ros | 第48-49页 |
3.1.6 新疆杨总RNA提取结果并作为模板扩增Del/Ros | 第49页 |
3.1.7 pMD19-Ros、pCXSN-Del的连接 | 第49-50页 |
3.1.8 pCAMBIA1305-Ros-Del的构建 | 第50页 |
3.1.9 转基因新疆杨的获得 | 第50-52页 |
3.1.10 Del/Ros-2、Del/Ros-5、WT中单宁含量的对比 | 第52-53页 |
3.1.11 DMACA染色检测叶片单宁含量 | 第53-54页 |
3.1.12 Del/Ros-2、Del/Ros-5、WT中花青素含量的对比 | 第54-55页 |
3.1.13 转基因新疆杨植株槲皮素、山奈酚含量的检测 | 第55-56页 |
3.1.14 转基因新疆杨总酚含量的检测分析 | 第56页 |
3.1.15 Del/Ros-2、Del/Ros-5、WT抗病性的比较分析 | 第56-58页 |
3.1.16 结论 | 第58-59页 |
3.2 讨论 | 第59-62页 |
3.2.1 杨树转基因工程进展 | 第59页 |
3.2.2 黄酮类化合物和杨树抗病性的关系 | 第59-60页 |
3.2.3 白杨派杨树的抗病性 | 第60-62页 |
参考文献 | 第62-65页 |
在学期间的研究成果 | 第65-66页 |
致谢 | 第66页 |