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基质中β-葡聚糖酶活力测定方法的研究

摘要第3-5页
ABSTRACT第5-7页
第一章 前言第12-25页
    1.1 β-葡聚糖酶简介第12-16页
        1.1.1 β-葡聚糖酶的类型第12-13页
        1.1.2 β-葡聚糖酶的来源及酶学活性第13页
        1.1.3 β-葡聚糖酶的结构第13-14页
        1.1.4 β-葡聚糖酶的应用第14-16页
            1.1.4.1 β-葡聚糖酶在制糖工业的应用第14页
            1.1.4.2 β-葡聚糖酶在植物防病害中的应用第14页
            1.1.4.3 β-葡聚糖酶在发酵工业中应用第14-15页
                1.1.4.3.1 β-葡聚糖酶在啤酒糖化工艺中的应用第15页
                1.1.4.3.2 β-葡聚糖酶在啤酒麦芽生产中的应用第15页
            1.1.4.4 β-葡聚糖酶在饲料工业中的应用第15-16页
                1.1.4.4.1 β-葡聚糖酶在猪饲料中的应用第15页
                1.1.4.4.2 β-葡聚糖酶在家禽饲料中的应用第15页
                1.1.4.4.3 β-葡聚糖酶在鱼类饲料中的应用第15-16页
            1.1.4.5 β-葡聚糖酶在其他方面的应用第16页
    1.2 饲用酶制剂简介第16-18页
        1.2.1 饲用酶制剂的类型第16页
        1.2.2 饲用酶制剂活力测定的影响因素第16-17页
            1.2.2.1 底物性质对饲用酶活力测定的影响第16-17页
            1.2.2.2 反应体系的离子强度对饲用酶制剂活力测定的影响第17页
            1.2.2.3 饲料样品中的提取对饲用酶制剂活力测定的影响第17页
            1.2.2.4 碳水化合物对饲用酶制剂活力测定的影响第17页
        1.2.3 开发应用饲用酶制剂的意义第17-18页
    1.3 β-葡聚糖酶活力测定方法的研究第18-24页
        1.3.1 粘度法第18页
        1.3.2 琼脂糖扩散法第18-19页
        1.3.3 生色底物法第19页
        1.3.4 酶联吸附分析法第19页
        1.3.5 还原端基法第19-22页
            1.3.5.1 方法概述第20-22页
                1.3.5.1.1 DNS法第20页
                1.3.5.1.2 Somogyi-Nelson5法(S-N5法)第20-21页
                1.3.5.1.3 PAHBAH法第21页
                1.3.5.1.4 BCA去第21页
                1.3.5.1.5 MBTH法第21-22页
            1.3.5.2 测定手段第22页
                1.3.5.2.1 试管法第22页
                1.3.5.2.2 灌法第22页
                1.3.5.2.3 微孔板法第22页
                1.3.5.2.4 流动注射法(Flow-injection Analysis,FIA)第22页
        1.3.6 其他可能用于β-葡聚糖酶活力测定的方法第22-23页
            1.3.6.1 安培法第23页
            1.3.6.2 等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry)第23页
        1.3.7 结论第23-24页
    1.4 研究的目的和意义第24-25页
第二章 MBTH法测定β-葡聚糖酶活力的研究第25-39页
    2.1 材料与方法第25-27页
        2.1.1 材料与试剂第25页
        2.1.2 仪器与设备第25-26页
        2.1.3 试验方法第26-27页
    2.2 结果与讨论第27-38页
        2.2.1 MBTH法测定参数的优化第28-34页
            2.2.1.1 测定还原糖条件优化第28-30页
                2.2.1.1.1 加热时间的确定第28-29页
                2.2.1.1.2 模拟酶解反应葡萄糖标准曲线的绘制第29-30页
            2.2.1.2 酶解液测定条件的优化第30-34页
                2.2.1.2.1 不同pH对酶活力的影响第30-31页
                2.2.1.2.2 不同反应温度对反应速率的影响第31页
                2.2.1.2.3 底物浓度的影响及Km值的计算第31-34页
        2.2.2 β-葡聚糖酶浓度曲线的建立及初步方法验证第34-38页
            2.2.2.1 β-葡聚糖酶浓度曲线的建立第34-36页
            2.2.2.2 加标回收率及精密度的测定第36-37页
            2.2.2.3 检测限的测定第37-38页
    2.3 小结第38-39页
第三章 三种测定β-葡聚糖酶活力的方法比较第39-55页
    3.1 材料与方法第40-42页
        3.1.1 材料与试剂第40页
        3.1.2 仪器与设备第40页
        3.1.3 试验方法第40-42页
    3.2 结果与讨论第42-54页
        3.2.1 三种方法的模拟酶解反应的葡萄糖标准曲线第43-47页
            3.2.1.1 MBTH法与经典DNS法、S-N法的比较第43-45页
            3.2.1.2 测定木聚糖酶活力的国标DNS法测定葡萄糖与经典DNS法的比较第45-47页
        3.2.2 三种方法的酶浓度标准曲线第47-53页
            3.2.2.1 DNS法测定β-葡聚糖酶活力第47-49页
                3.2.2.1.1 加碱终止酶催化反应的DNS法第47-48页
                3.2.2.1.2 参照木聚糖酶活力测定的国标法测定β-葡聚糖酶浓度曲线第48-49页
            3.2.2.2 S-N法第49-51页
            3.2.2.3 MBTH法第51-53页
        3.2.3 回收率及精密度的比较第53页
        3.2.4 检测限的比较第53-54页
    3.3 小结第54-55页
第四章 基质中β-葡聚糖酶活力测定第55-64页
    4.1 材料与方法第56-58页
        4.1.1 材料与试剂第56页
        4.1.2 仪器与设备第56页
        4.1.3 试验方法第56-58页
    4.2 结果与讨论第58-63页
        4.2.1 不同浸提方法对饲料本身稳定性的影响第58-59页
        4.2.2 磁力搅拌过程对酶活力测定的影响第59页
        4.2.3 样品预处理对酶活力测定的影响第59-60页
        4.2.4 饲料样品的酶活力测定第60-61页
        4.2.5 饲料中酶浓度曲线的建立第61页
        4.2.6 批间精密度的计算第61-62页
        4.2.7 回收率的计算第62-63页
    4.3 结论第63-64页
第五章 高通量分析法测定β-葡聚糖酶活力第64-77页
    5.1 材料与方法第64-67页
        5.1.1 材料与试剂第64页
        5.1.2 仪器与设备第64页
        5.1.3 溶液配制第64-65页
        5.1.4 试验方法第65-67页
    5.2 结果与讨论第67-75页
        5.2.1 不同混匀方法的比较第67-68页
        5.2.2 葡萄糖标准曲线的测定第68-69页
        5.2.3 β-葡聚糖酶浓度曲线的建立第69-70页
        5.2.4 方法验证第70-72页
            5.2.4.1 检测限及定量限的计算第70-71页
            5.2.4.2 回收率的测定第71-72页
        5.2.5 高通量分析法在饲料样品测定中的应用第72-75页
            5.2.5.1 A样品酶活力测定第72-73页
            5.2.5.2 饲料中β-葡聚糖酶浓度曲线的建立第73-74页
            5.2.5.3 初步的方法验证的研究第74-75页
                5.2.5.3.1 检测限及定量限的计算第74-75页
                5.2.5.3.2 回收率的计算第75页
    5.3 小结第75-77页
结论第77-78页
本文创新点第78-79页
参考文献第79-87页
致谢第87-88页
攻读学位期间发表的学术论文和申请的专利第88-89页

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