| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 储藏蛋白质简介 | 第9-11页 |
| 1.1.1 储藏蛋白质的分类 | 第9-10页 |
| 1.1.2 储藏蛋白质的细胞内转运 | 第10-11页 |
| 1.1.3 储藏蛋白质的加工 | 第11页 |
| 1.1.4 储藏蛋白质品质的影响因素 | 第11页 |
| 1.2 SNARE蛋白的研究进展 | 第11-17页 |
| 1.2.1 SNARE蛋白的结构与分类 | 第12页 |
| 1.2.2 SNARE复合体的形成和作用机制 | 第12-13页 |
| 1.2.3 SNARE蛋白的功能 | 第13-14页 |
| 1.2.4 SNARE复合体的调节因子 | 第14-16页 |
| 1.2.5 SNARE蛋白的生理学意义 | 第16-17页 |
| 1.3 AtUse1 | 第17-18页 |
| 2 实验材料和方法 | 第18-43页 |
| 2.1 植物材料及培养方法 | 第18页 |
| 2.2 菌株及载体 | 第18页 |
| 2.3 试剂 | 第18页 |
| 2.4 仪器 | 第18-19页 |
| 2.5 突变体筛选 | 第19-22页 |
| 2.5.1 试剂配制 | 第19页 |
| 2.5.2 样品采集 | 第19页 |
| 2.5.3 植物全基因组DNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.5.4 T-DNA突变体插入位点特异性PCR | 第20页 |
| 2.5.5 T-DNA特异性PCR | 第20-21页 |
| 2.5.6 突变体纯合体的筛选 | 第21-22页 |
| 2.6 质粒构建 | 第22-27页 |
| 2.6.1 cDNA模板的制备 | 第22-23页 |
| 2.6.2 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.6.3 AtUse1 CDS序列的PCR扩增 | 第24页 |
| 2.6.4 PCR产物的回收 | 第24-25页 |
| 2.6.5 TOPO反应 | 第25-27页 |
| 2.6.6 LR反应制备终载体质粒 | 第27页 |
| 2.7 转基因植株的制作 | 第27-29页 |
| 2.7.1 试剂准备 | 第28页 |
| 2.7.2 植物表达载体的农杆菌转化 | 第28-29页 |
| 2.7.3 农杆菌侵染及转基因植株纯合体的筛选 | 第29页 |
| 2.8 瞬时表达 | 第29-32页 |
| 2.8.1 PEG介导的原生质体瞬时表达 | 第30-31页 |
| 2.8.2 基因枪瞬时转化法 | 第31-32页 |
| 2.9 酵母双杂交 | 第32-35页 |
| 2.9.1 酵母双杂交原理 | 第32-33页 |
| 2.9.2 试剂配制 | 第33-34页 |
| 2.9.3 酵母复苏 | 第34-35页 |
| 2.9.4 酵母感受态的制备 | 第35页 |
| 2.9.5 待测质粒的转化 | 第35页 |
| 2.9.6 报告基因的检测 | 第35页 |
| 2.10 western-blot | 第35-40页 |
| 2.10.1 试剂准备 | 第36-37页 |
| 2.10.2 样品制备 | 第37-38页 |
| 2.10.3 SDS-PAGE | 第38页 |
| 2.10.4 转膜 | 第38-39页 |
| 2.10.5 抗体与抗原的杂交 | 第39页 |
| 2.10.6 显影 | 第39-40页 |
| 2.11 过表达转基因植株的western-blot检测 | 第40页 |
| 2.11.1 样品制备 | 第40页 |
| 2.11.2 操作方法 | 第40页 |
| 2.12 pull-down分析 | 第40-43页 |
| 2.12.1 材料培养 | 第40页 |
| 2.12.2 试剂准备 | 第40-41页 |
| 2.12.3 植物组织的裂解 | 第41页 |
| 2.12.4 目标蛋白的磁性标记及分离 | 第41页 |
| 2.12.5 SDS-PAGE检测 | 第41页 |
| 2.12.6 PAGE胶银染分析 | 第41-43页 |
| 3 实验结果与分析 | 第43-52页 |
| 3.1 atuse11突变体筛选 | 第43-45页 |
| 3.1.1 AtUse11的基因结构及T-DNA插入位点 | 第43页 |
| 3.1.2 atuse11 T-DNA插入突变体筛选 | 第43-44页 |
| 3.1.3 AtUse12 RNAi植株的制作 | 第44页 |
| 3.1.4 种子储藏蛋白质的western检测 | 第44-45页 |
| 3.2 AtUse1的亚细胞定位分析 | 第45-47页 |
| 3.2.1 AtUse11的亚细胞定位 | 第45-46页 |
| 3.2.2 AtUse12的亚细胞定位 | 第46-47页 |
| 3.3 AtUse11、AtUse12与其它蛋白的相互作用 | 第47-49页 |
| 3.3.1 Y2H检测AtUse11、AtUse12与AtSec20的相互作用 | 第47-48页 |
| 3.3.2 Y2H检测AtUse11、AtUse12与AtUfe1的相互作用 | 第48-49页 |
| 3.4 AtUsel新型作用因子的探究 | 第49-51页 |
| 3.4.1 myc-AtUse1过表达转基因植株制作与检测 | 第49-50页 |
| 3.4.2 新型互作因子的发掘 | 第50-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
