| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一部分 MiR100对乳腺肿瘤的调控及分子机制 | 第12-48页 |
| 第1章 绪论 | 第14-20页 |
| 1.1 乳腺肿瘤干细胞 | 第14-15页 |
| 1.2 WNT信号通路与乳腺癌 | 第15-17页 |
| 1.3 MicroRNAs与癌症 | 第17-20页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第20-28页 |
| 2.1 实验材料,试剂和仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第21页 |
| 2.2.2 质粒构建和病毒感染 | 第21-22页 |
| 2.2.3 Aldefluor实验和流式实验 | 第22页 |
| 2.2.4 MTT实验 | 第22页 |
| 2.2.5 RNA抽提 | 第22-23页 |
| 2.2.6 反转录和实时荧光定量PCR | 第23页 |
| 2.2.7 基因芯片和数据分析 | 第23-24页 |
| 2.2.8 NOD/SCID小鼠肿瘤发生 | 第24页 |
| 2.2.9 鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)侵袭实验 | 第24页 |
| 2.2.10 心内注射 | 第24页 |
| 2.2.11 生物发光成像 | 第24-25页 |
| 2.2.12 免疫组化 | 第25页 |
| 2.2.13 原位杂交 | 第25-26页 |
| 2.2.14 荧光素酶报告分析 | 第26页 |
| 2.2.15 统计学分析 | 第26-28页 |
| 第3章 实验结果 | 第28-46页 |
| 3.1 MiR100在SUM159-ALDH阳性乳腺癌细胞中低表达 | 第28页 |
| 3.2 MiR100在乳腺癌ALDH阳性细胞群中低表达 | 第28-29页 |
| 3.3 MiR100表达量与细胞系分型无明显关系 | 第29-30页 |
| 3.4 建立MiR100过表达乳腺癌细胞系 | 第30页 |
| 3.5 MiR100过表达降低乳腺癌干细胞含量 | 第30-31页 |
| 3.6 MiR100过表达抑制乳腺癌细胞增殖 | 第31-33页 |
| 3.7 MiR100过表达抑制乳腺癌干细胞的增殖 | 第33页 |
| 3.8 MiR100过表达抑制小鼠模型中的肿瘤生长 | 第33-35页 |
| 3.9 敲低MiR100促进肿瘤发展 | 第35-36页 |
| 3.10 MiR100过表达抑制肿瘤转移 | 第36-38页 |
| 3.11 纳米载体定向输送MiR100抑制肿瘤体内生长 | 第38-39页 |
| 3.12 确定MiR100的下游靶点 | 第39-40页 |
| 3.13 确定SMARCA5,SMARCD1和BMPR2受MiR100直接调控 | 第40-41页 |
| 3.14 过表达SMARCA5或SMARCD1回补MiR100在肿瘤中的作用 | 第41-42页 |
| 3.15 SMARCA5,SMARCD1和BMPR2的敲低抑制肿瘤发展 | 第42-44页 |
| 3.16 MiR100在乳腺癌病人组织样本中的表达 | 第44-46页 |
| 第4章 讨论 | 第46-48页 |
| 第二部分 NMT1对乳腺肿瘤发展的调控及分子机制 | 第48-90页 |
| 第1章 绪论 | 第50-58页 |
| 1.1 JNK信号通路与乳腺癌 | 第50-53页 |
| 1.2 活性氧与乳腺癌 | 第53-56页 |
| 1.3 NMT1与癌症 | 第56-58页 |
| 第2章 实验方法 | 第58-66页 |
| 2.1 细胞培养和实验试剂 | 第58页 |
| 2.2 人转录组芯片分析以及MiR100下游基因鉴定 | 第58页 |
| 2.3 质粒构建和病毒感染 | 第58-59页 |
| 2.4 流式实验 | 第59-60页 |
| 2.5 微球形成实验 | 第60页 |
| 2.6 RNA抽提和实时定量荧光PCR | 第60-61页 |
| 2.7 蛋白免疫印迹 | 第61-62页 |
| 2.8 免疫共沉淀和基因功能富集分析 | 第62页 |
| 2.9 抗体芯片 | 第62-63页 |
| 2.10 免疫组化 | 第63页 |
| 2.11 MTT实验 | 第63页 |
| 2.12 克隆形成实验 | 第63页 |
| 2.13 划痕实验 | 第63-64页 |
| 2.14 侵袭实验 | 第64页 |
| 2.15 小鼠体内实验 | 第64页 |
| 2.16 数据分析 | 第64-66页 |
| 第3章 实验结果 | 第66-86页 |
| 3.1 NMT1在乳腺肿瘤组织中存在表达上调 | 第66-67页 |
| 3.2 建立NMT1敲低的乳腺癌细胞系 | 第67-68页 |
| 3.3 体外敲低NMT1抑制乳腺肿瘤细胞的起始,增殖和迁移 | 第68-69页 |
| 3.4 敲低NMT1抑制小鼠体内移植瘤的生长和转移 | 第69-70页 |
| 3.5 敲低NMT1引起内质网应激反应 | 第70-71页 |
| 3.6 药物学抑制内质网应激部分回补NMT1敲低的影响 | 第71-72页 |
| 3.7 内质网应激关键蛋白的敲低部分回补NMT1敲低的影响 | 第72-73页 |
| 3.8 小鼠实验验证抑制内质网应激回补NMT1敲低的影响 | 第73-75页 |
| 3.9 NMT1敲低引起泛素化蛋白聚集 | 第75-76页 |
| 3.10 敲低NMT1产生氧化应激反应 | 第76-77页 |
| 3.11 活性氧负调控NMT1的蛋白表达 | 第77-78页 |
| 3.12 NMT1敲低后激活JNK信号通路 | 第78-79页 |
| 3.13 NMT1敲低引起细胞自噬 | 第79-80页 |
| 3.14 NMT1敲低引起的自噬是通过JNK通路介导的 | 第80-81页 |
| 3.15 抑制JNK信号通路部分回补了NMT1敲低的影响 | 第81-82页 |
| 3.16 小鼠成瘤实验验证JNK通路在NMT1敲低后的作用 | 第82-83页 |
| 3.17 JNK信号通路的激活是通过内质网应激和氧化应激反应 | 第83-86页 |
| 第4章 讨论 | 第86-90页 |
| 参考文献 | 第90-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第106页 |
