| 摘要 | 第9-13页 |
| Abstract | 第13-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-35页 |
| 1.1 概述 | 第19页 |
| 1.2 泛素蛋白酶体系统 | 第19-25页 |
| 1.2.1 泛素蛋白酶体系统介绍 | 第19-20页 |
| 1.2.2 泛素化 | 第20-23页 |
| 1.2.3 蛋白酶体降解 | 第23-24页 |
| 1.2.4 泛素蛋白酶体与肿瘤 | 第24-25页 |
| 1.3 CSN复合体的生物学特点及作用 | 第25-29页 |
| 1.3.1 CSN复合体的结构特点 | 第25-26页 |
| 1.3.2 CSN复合体的分子生物学作用 | 第26-28页 |
| 1.3.3 CSN复合体与肿瘤的关系 | 第28-29页 |
| 1.4 CSN6的生物学特点及与肿瘤的关系 | 第29-32页 |
| 1.4.1 CSN6的生物学作用 | 第29-30页 |
| 1.4.2 CSN6与肿瘤的关系 | 第30-32页 |
| 1.5 EGFR的生物学特点及与肿瘤的关系 | 第32-35页 |
| 1.5.1 EGFR的生物学作用 | 第32-33页 |
| 1.5.2 EGFR蛋白稳定性的调控 | 第33-34页 |
| 1.5.3 EGFR与肿瘤的关系 | 第34-35页 |
| 第2章 引言 | 第35-39页 |
| 2.1 研究背景及目的意义 | 第35-36页 |
| 2.1.1 研究背景 | 第35-36页 |
| 2.1.2 研究目的及意义 | 第36页 |
| 2.2 主要研究内容 | 第36-38页 |
| 2.3 技术路线 | 第38-39页 |
| 第3章 CSN6对胶质母细胞瘤预后的影响及其表达分析 | 第39-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-45页 |
| 3.1.1 组织样本和细胞系 | 第39页 |
| 3.1.2 临床样本在线数据库 | 第39页 |
| 3.1.3 数据分析软件 | 第39页 |
| 3.1.4 实验试剂 | 第39-41页 |
| 3.1.5 主要实验溶液的配制 | 第41-44页 |
| 3.1.6 主要仪器 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-50页 |
| 3.2.1 细胞复苏 | 第45页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第45页 |
| 3.2.3 细胞传代 | 第45-46页 |
| 3.2.4 细胞冻存 | 第46页 |
| 3.2.5 组织包埋及切片 | 第46页 |
| 3.2.6 免疫组织化学染色(IHC) | 第46-48页 |
| 3.2.7 免疫印迹法检测蛋白表达(WB) | 第48-49页 |
| 3.2.8 预后分析 | 第49页 |
| 3.2.9 统计分析 | 第49-50页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第50-51页 |
| 3.3.1 CSN6在胶质母细胞瘤临床样本及胶质母细胞瘤细胞系中的表达分析 | 第50页 |
| 3.3.2 CSN6的表达与胶质瘤病人的预后关系分析 | 第50-51页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 CSN6对胶质母细胞瘤增殖、迁移、侵袭及成瘤能力的影响 | 第53-84页 |
| 4.1 实验材料 | 第53-61页 |
| 4.1.1 实验细胞 | 第53页 |
| 4.1.2 实验动物 | 第53页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第53-56页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第56-57页 |
| 4.1.5 主要实验试剂的配制 | 第57-61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61-75页 |
| 4.2.1 RNA提取及荧光实时定量PCR | 第61-63页 |
| 4.2.2 CSN6干扰载体及CSN6过表达载体构建 | 第63-66页 |
| 4.2.3 超纯质粒提取 | 第66页 |
| 4.2.4 慢病毒转染及细胞感染 | 第66-67页 |
| 4.2.5 免疫印迹法检测蛋白表达(WB) | 第67-68页 |
| 4.2.6 MTT实验 | 第68-69页 |
| 4.2.7 BrdU实验 | 第69-70页 |
| 4.2.8 流式细胞实验 | 第70页 |
| 4.2.9 细胞划痕实验 | 第70页 |
| 4.2.10 Transwell实验 | 第70-72页 |
| 4.2.11 软琼脂克隆形成实验 | 第72页 |
| 4.2.12 小鼠原位移植实验 | 第72页 |
| 4.2.13 组织包埋及切片 | 第72-73页 |
| 4.2.14 H&E染色 | 第73-74页 |
| 4.2.15 免疫组织化学染色(IHC) | 第74-75页 |
| 4.2.16 统计分析 | 第75页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第75-82页 |
| 4.3.1 shCSN6载体干扰效率的鉴定 | 第75-76页 |
| 4.3.2 下调CSN6之后对胶质母细胞瘤增殖、迁移、侵袭以及成瘤能力的影响 | 第76-79页 |
| 4.3.3 下调CSN6之后再恢复CSN6的表达可显著恢复对胶质母细胞瘤增殖、迁移、侵袭以及成瘤能力的影响 | 第79-82页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第82-84页 |
| 第五章 CSN6对EGFR通路的影响及其调控机制 | 第84-110页 |
| 5.1 实验材料 | 第84-92页 |
| 5.1.1 实验细胞 | 第84页 |
| 5.1.2 实验动物 | 第84页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第84-87页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第87-88页 |
| 5.1.5 主要实验试剂的配制 | 第88-92页 |
| 5.2 实验方法 | 第92-100页 |
| 5.2.1 RNA提取及荧光实时定量PCR | 第92页 |
| 5.2.2 载体构建 | 第92-95页 |
| 5.2.3 超纯质粒提取 | 第95页 |
| 5.2.4 慢病毒转染及细胞感染 | 第95-96页 |
| 5.2.5 免疫印迹法检测蛋白表达(WB) | 第96页 |
| 5.2.6 MTT实验 | 第96-97页 |
| 5.2.7 Transwell实验 | 第97页 |
| 5.2.8 软琼脂克隆形成实验 | 第97页 |
| 5.2.9 小鼠原位移植实验 | 第97页 |
| 5.2.10 组织包埋及切片 | 第97-98页 |
| 5.2.11 H&E染色 | 第98页 |
| 5.2.12 免疫组织化学染色(IHC) | 第98页 |
| 5.2.13 免疫共沉淀实验(Co-IP) | 第98-99页 |
| 5.2.14 蛋白周转率实验 | 第99页 |
| 5.2.15 体外泛素化实验 | 第99-100页 |
| 5.2.16 统计分析 | 第100页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第100-108页 |
| 5.3.1 CSN6通过调节EGFR介导的信号传导途径进而促进胶质母细胞瘤细胞增殖和转移 | 第100-102页 |
| 5.3.2 CSN6通过减少EGFR的泛素化来维持EGFR蛋白的稳定性 | 第102-103页 |
| 5.3.3 CSN6与E3泛素化连接酶CHIP相互作用 | 第103-104页 |
| 5.3.4 CSN6调控CHIP的泛素化降解 | 第104-106页 |
| 5.3.5 在CSN6下调的细胞中再次下调CHIP可以部分恢复CSN6对胶质母细胞瘤增殖和转移的抑制作用 | 第106-108页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第108-110页 |
| 第六章 综合与讨论 | 第110-112页 |
| 6.1 CSN6对胶质母细胞瘤预后的影响及其表达分析 | 第110页 |
| 6.2 CSN6对胶质母细胞瘤增殖、迁移、侵袭及成瘤能力的影响 | 第110-111页 |
| 6.3 CSN6对EGFR通路的影响及其调控机制 | 第111-112页 |
| 论文创新点 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-132页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第132-134页 |
| 参研课题情况 | 第134-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
