| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 研究背景 | 第12-13页 |
| 1.2 大豆疫霉及大豆疫霉根腐病 | 第13页 |
| 1.3 勃利霉素及其抑菌作用途径研究 | 第13-14页 |
| 1.3.1 苏氨酰-tRNA合成途径 | 第13-14页 |
| 1.3.2 细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶途径 | 第14页 |
| 1.4 RNA干扰技术原理及应用 | 第14-15页 |
| 1.5 课题研究的目的与意义 | 第15-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-42页 |
| 2.1 材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 工具酶及试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 培养基及溶液 | 第18-21页 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 | 第21页 |
| 2.2 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2基因生物信息学分析 | 第21-22页 |
| 2.3 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2在大肠杆菌中的克隆表达 | 第22-29页 |
| 2.3.1 大豆疫霉cDNA的制备 | 第22页 |
| 2.3.2 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2基因的克隆及转化 | 第22-28页 |
| 2.3.3 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2基因的体外表达 | 第28-29页 |
| 2.4 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2在毕赤酵母中表达 | 第29-37页 |
| 2.4.1 毕赤酵母表达载体构建 | 第29-33页 |
| 2.4.2 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2在毕赤酵母中表达 | 第33-37页 |
| 2.5 勃利霉素与大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2荧光光谱检测 | 第37页 |
| 2.6 大豆疫霉中利用双链RNA介导的基因沉默 | 第37-42页 |
| 2.6.1 dsRNA合成 | 第37-39页 |
| 2.6.2 大豆疫霉瞬时转化 | 第39-40页 |
| 2.6.3 转化子菌株生长速率的测定 | 第40页 |
| 2.6.4 转化子孢子囊诱导 | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-62页 |
| 3.1 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2基因生物信息学分析 | 第42-45页 |
| 3.2 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2在大肠杆菌中的克隆表达 | 第45-49页 |
| 3.2.1 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2基因的克隆 | 第45-48页 |
| 3.2.2 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2基因的体外表达 | 第48-49页 |
| 3.3 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2在毕赤酵母中表达 | 第49-55页 |
| 3.3.1 毕赤酵母表达载体pPIC9K-psCdc2的构建 | 第49-51页 |
| 3.3.2 表达载体pPIC9K-psCdc2在毕赤酵母酵母中的表达 | 第51-55页 |
| 3.4 勃利霉素对大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2的猝灭作用 | 第55-57页 |
| 3.5 dsRNA介导的大豆疫霉psCdc2基因沉默 | 第57-62页 |
| 3.5.1 原生质体制备酶浓度的筛选 | 第57-58页 |
| 3.5.2 dsRNA的合成 | 第58-59页 |
| 3.5.3 转化过程中原生质体浓度筛选 | 第59-60页 |
| 3.5.4 转化子菌株表型分析 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| 4.1 勃利霉素对大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶作用预测 | 第62页 |
| 4.2 勃利霉素对大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2的作用 | 第62-63页 |
| 4.3 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2的功能分析 | 第63-66页 |
| 5 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 个人简历 | 第78-80页 |
| 附录 | 第80页 |
