| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 摘要 | 第11-14页 |
| Absract | 第14-17页 |
| 前言 | 第18-23页 |
| 第一章 体外测试贝氏柯克斯体LpxC敏感性并建立稳定的LpxC抑制条件 | 第23-47页 |
| 引言 | 第23-24页 |
| 1 材料 | 第24-30页 |
| 1.1 菌株、细胞与质粒 | 第24-25页 |
| 1.2 仪器设备 | 第25页 |
| 1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.4 重要试剂的配制 | 第26-30页 |
| 2 方法 | 第30-39页 |
| 2.1 细胞的复苏、培养与冻存 | 第30-31页 |
| 2.2 贝氏柯克斯体的感染、培养与纯化 | 第31-32页 |
| 2.3 在Vero细胞培养体系中,测试单高一浓度LpxC抑制剂对贝氏柯克斯体生长表型的影响 | 第32-33页 |
| 2.4 敲除大肠杆菌lpxC同时引入贝氏柯克斯体lpxC,构建大肠杆菌替代测试模型 | 第33-36页 |
| 2.5 在大肠杆菌替代模型中测试贝氏柯克斯体LpxC对于抑制剂LPC-011的敏感性 | 第36-37页 |
| 2.6 Real-TimeqPCR定量单一高浓度抑制剂LPC-011作用下,贝氏柯克斯体在无细胞培养体系中的基因组拷贝数 | 第37-38页 |
| 2.7 评价抑制剂LPC-011在细胞/无细胞培养体系中的抑制活性 | 第38-39页 |
| 2.8 统计学分析 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-45页 |
| 3.1 初始加入单一高浓度LpxC抑制剂对贝氏柯克斯体在Vero细胞内的生长繁殖无影响 | 第39-40页 |
| 3.2 在大肠杆菌替代模型E.coliBL21(DE3)lpxC::GIIpCBlpxC中,抑制剂LPC-011对贝氏柯克斯体LpxC的最低抑制浓度小于0.05μg/ml,且小于对大肠杆菌的最小抑菌浓度 | 第40-42页 |
| 3.3 初始加入单一高浓度抑制剂LPC-011降低了贝氏柯克斯体在无细胞培养体系中的产量 | 第42-43页 |
| 3.4 在无细胞培养体系中,抑制剂LPC-011能够保持大肠杆菌抑菌浓度长达7天以上 | 第43-44页 |
| 3.5 在细胞培养环境中,抑制剂LPC-011能够在48h内保持稳定的大肠杆菌抑菌浓度 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第二章 贝氏柯克斯体类脂A修饰突变株的构建及类脂A检测方法的建立 | 第47-71页 |
| 引言 | 第47-48页 |
| 1 材料 | 第48-50页 |
| 1.1 菌株、细胞与质粒 | 第48页 |
| 1.2 仪器设备 | 第48-49页 |
| 1.3 主要试剂 | 第49页 |
| 1.4 重要试剂的配制 | 第49-50页 |
| 2 方法 | 第50-61页 |
| 2.1 穿梭质粒pMMBGK的设计与构建 | 第50-55页 |
| 2.2 穿梭质粒pMMBGKkdtA的设计与构建 | 第55-56页 |
| 2.3 贝氏柯克斯体的转化与培养 | 第56-58页 |
| 2.4 贝氏柯克斯体转化菌株的表型鉴定 | 第58-59页 |
| 2.5 在BGMK、THP-1细胞培养体系中,测试抑制剂LPC-011能否有效抑制贝氏柯克斯体转化菌株类脂A的合成 | 第59-60页 |
| 2.6 Real-TimeqPCR定量贝氏柯克斯体转化菌株的基因组拷贝数 | 第60页 |
| 2.7 在无细胞培养体系中,测试抑制剂LPC-011能否有效抑制贝氏柯克斯体转化菌株类脂A的合成 | 第60-61页 |
| 2.8 统计学分析 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-68页 |
| 3.1 成功构建穿梭质粒pMMBGK与pMMBGKkdtA | 第61-63页 |
| 3.2 成功构建贝氏柯克斯体转化菌株C.burnetiiNMIIpMMBGK与类脂A修饰突变株C.burnetiiNMIIpMMBGKkdtA并鉴定表型 | 第63页 |
| 3.3 穿梭质粒pMMBGKkdtA能够与贝氏柯克斯体内源质粒QpH1兼容共存 | 第63-64页 |
| 3.4 在BGMK细胞内,抑制剂LPC-011可有效抑制贝氏柯克斯体转化菌株类脂A的合成 | 第64-65页 |
| 3.5 在THP-1细胞内,抑制剂LPC-011能够有效抑制类脂A修饰菌的囊泡形成与菌体生长 | 第65-66页 |
| 3.6 抑制剂LPC-011可降低贝氏柯克斯体类脂A修饰菌在非吞噬、吞噬细胞中的产量 | 第66-67页 |
| 3.7 在无细胞培养体系中,LPC-011可显著抑制贝氏柯克斯体转化菌株类脂A的合成 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-71页 |
| 第三章 在不同培养环境中测试野生型贝氏柯克斯体类脂A的生物学作用 | 第71-86页 |
| 引言 | 第71页 |
| 1 材料 | 第71-73页 |
| 1.1 菌株与细胞 | 第71-72页 |
| 1.2 仪器设备 | 第72页 |
| 1.3 主要试剂 | 第72-73页 |
| 1.4 重要试剂的配制 | 第73页 |
| 2 方法 | 第73-77页 |
| 2.1 贝氏柯克斯体的培养与纯化 | 第73-74页 |
| 2.2 贝氏柯克斯体基因组拷贝数的定量 | 第74页 |
| 2.3 测试类脂A化学敲除的贝氏柯克斯体在BGMK细胞内的生长表型 | 第74-75页 |
| 2.4 测试类脂A化学敲除的贝氏柯克斯体在THP-1细胞内的生长表型.. | 第75-76页 |
| 2.5 Real-TimeqPCR定量贝氏柯克斯体基因组拷贝数 | 第76页 |
| 2.6 透射电镜分析贝氏柯克斯体的双相发育形态 | 第76-77页 |
| 2.7 统计学分析 | 第77页 |
| 3 结果 | 第77-84页 |
| 3.1 在BGMK细胞培养体系中,LPC-011降低了贝氏柯克斯体囊泡数目,同时对菌体的生长分裂及分化无显著影响 | 第77-78页 |
| 3.2 在BGMK细胞中,LPC-011对I相贝氏柯克斯体具有与II相菌类似的抑制效果,且对I相菌体的亲水生长表型无显著影响 | 第78-79页 |
| 3.3 在BGMK细胞中,LPC-011降低II相贝氏柯克斯体的囊泡数目约60%,降低I相贝氏柯克斯体的囊泡数目约70% | 第79-80页 |
| 3.4 在BGMK细胞中,LPC-011不影响贝氏柯克斯体的双相发育周期,也不影响大贝氏体至小贝氏体的形态发育 | 第80-81页 |
| 3.5 在LPC-011处理的THP-1细胞中,II相贝氏柯克斯体形成小囊泡,同时菌体有限繁殖 | 第81页 |
| 3.6 在LPC-011处理的THP-1细胞中,I相贝氏柯克斯体具有与II相菌类似的生长表型 | 第81-82页 |
| 3.7 LPC-011降低了I相、II相贝氏柯克斯体在BGMK细胞内的产量 | 第82-83页 |
| 3.8 在LPC-011处理的THP-1细胞中,I相和II相菌体有限增殖且均有菌体量增加的趋势 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-86页 |
| 第四章 贝氏柯克斯体抵抗高渗透压存活机制的蛋白质组学分析 | 第86-96页 |
| 引言 | 第86页 |
| 1 材料 | 第86-89页 |
| 1.1 菌株与细胞 | 第86-87页 |
| 1.2 仪器设备 | 第87页 |
| 1.3 主要试剂 | 第87-88页 |
| 1.4 重要试剂的配制 | 第88-89页 |
| 2 方法 | 第89-91页 |
| 2.1 不同渗透压环境下贝氏柯克斯体的培养 | 第89页 |
| 2.2 双向电泳分析贝氏柯克斯体蛋白质组 | 第89-90页 |
| 2.3 聚丙烯酰胺凝胶的银染显色 | 第90页 |
| 2.4 图像获取与灰度值分析 | 第90-91页 |
| 2.5 质谱分析 | 第91页 |
| 2.6 生物信息学分析 | 第91页 |
| 3 结果 | 第91-94页 |
| 3.1 贝氏柯克斯体可以在高渗透压条件下适应性存活 | 第91页 |
| 3.2 不同渗透压条件下,培养所得贝氏柯克斯体蛋白的双向电泳分析 | 第91-93页 |
| 3.3 生物信息学检索分析差异蛋白点 | 第93-94页 |
| 4 讨论 | 第94-96页 |
| 结论与展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-106页 |
| 作者在学期间获得的学术成果 | 第106-108页 |
| 主要简历 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 附件 | 第110-130页 |
