| CONTENTS | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-28页 |
| 1.1 植物三萜类化合物的研究进展 | 第12-20页 |
| 1.1.1 三萜类化合物的化学结构与合成途径 | 第12-15页 |
| 1.1.2 植物三萜的生理活性和药用用途 | 第15-17页 |
| 1.1.3 植物三萜类的药用用途 | 第17-18页 |
| 1.1.4 蕨类植物三萜研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2 鲨烯合成酶研究进展 | 第20-22页 |
| 1.2.1 鲨烯合成酶的催化机制 | 第20-21页 |
| 1.2.2 鲨烯合成酶基因的存在及其蛋白特征 | 第21页 |
| 1.2.3 鲨烯合成酶的表达调控 | 第21-22页 |
| 1.3 香鳞毛蕨研究现状 | 第22-26页 |
| 1.3.1 香鳞毛蕨植物形态 | 第22-23页 |
| 1.3.2 香鳞毛蕨的化学成分 | 第23-24页 |
| 1.3.3 香鳞毛蕨的药理作用 | 第24-26页 |
| 1.4 本研究目的意义及技术路线 | 第26-28页 |
| 1.4.1 研究目的意义 | 第26-27页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-42页 |
| 2.1 试验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 菌种和载体 | 第28页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-42页 |
| 2.2.1 香鳞毛蕨目的基因的筛选 | 第29页 |
| 2.2.2 香鳞毛蕨鲨烯合成酶基因的克隆 | 第29-36页 |
| 2.2.3 生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 2.2.4 原核表达 | 第37-40页 |
| 2.2.5 香鳞毛蕨鲨烯合成酶基因组织表达差异分析 | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-66页 |
| 3.1 香鳞毛蕨转录组信息挖掘及目的基因的确定 | 第42-44页 |
| 3.2 香鳞毛蕨鲨烯合成酶基因的克隆 | 第44-47页 |
| 3.2.1 香鳞毛蕨总RNA提取 | 第44页 |
| 3.2.2 目的基因片段获得 | 第44-45页 |
| 3.2.3 3 ’和5’-RACE | 第45-46页 |
| 3.2.4 cDNA扩增 | 第46-47页 |
| 3.3 生物信息学分析 | 第47-60页 |
| 3.3.1 ORF(open reading frame)预测及BLASTP比对 | 第47-50页 |
| 3.3.2 蛋白基本性质及二、三级结构预测 | 第50-52页 |
| 3.3.3 蛋白跨膜域、亲/疏水性、信号肽及二硫键预测 | 第52-54页 |
| 3.3.4 DfSQS1蛋白修饰位点预测 | 第54-55页 |
| 3.3.5 DfSQS1蛋白细胞定位预测 | 第55-56页 |
| 3.3.6 不同物种间鲨烯合成酶蛋白序列比对及绘制系统发生树 | 第56-60页 |
| 3.4 香鳞毛蕨鲨烯合成酶的原核表达 | 第60-63页 |
| 3.4.1 原核表达载体pET-27-DfSQS1构建 | 第60-61页 |
| 3.4.2 重组表达质粒鉴定 | 第61-62页 |
| 3.4.3 表达载体的转化与目的蛋白表达 | 第62-63页 |
| 3.5 香鳞毛蕨鲨烯合成酶基因的组织表达差异分析 | 第63-66页 |
| 3.5.1 香鳞毛蕨不同组织总RNA的提取 | 第63页 |
| 3.5.2 DfSQS1荧光定量表达分析 | 第63-65页 |
| 3.5.3 Real-time PCR结果分析 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| 4.1 转录组技术挖掘基因资源的优势 | 第66页 |
| 4.2 DfSQS1的基因结构、蛋白功能预测及进化分析 | 第66-67页 |
| 4.3 跨膜域对DfSQS1原核表达造成的影响 | 第67-68页 |
| 4.4 DfSQS1组织表达差异的探讨 | 第68-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第82页 |
