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新型鸭肝炎病毒全基因组测序及其VP1基因的克隆表达分析

中文摘要第1-11页
Abstract第11-14页
1 引言第14-31页
   ·病原学研究第15-17页
     ·Ⅰ型DHV 的病原学特点第15-16页
     ·Ⅱ型DHV 的病原学特点第16页
     ·Ⅲ型DHV 的病原学特点第16-17页
     ·新型DHV 的病原学特点第17页
   ·分子生物学研究第17-19页
   ·流行病学的研究第19-21页
   ·临床症状及病理特征第21-22页
     ·临床症状第21页
     ·病理特征第21-22页
   ·诊断第22-27页
     ·病毒分离第22页
     ·电镜检测第22-23页
     ·实验室诊断方法第23-27页
       ·血清中和试验(Virus-neutralization test, VN)第23-24页
       ·酶联免疫吸附试验(ELISA)第24-25页
       ·琼脂免疫扩散试验第25页
       ·间接血凝(IHA)第25-26页
       ·直接荧光抗体检测(FA)第26页
       ·胶体金法(DIGFA)第26页
       ·分子生物学诊断技术第26-27页
   ·预防与治疗第27-30页
     ·预防第27-28页
     ·治疗第28-30页
   ·本研究的目的及意义第30-31页
2 材料与方法第31-54页
   ·一株新型DHV 的分离及RT-PCR 鉴定第31-39页
     ·载体与毒(菌)株第31页
     ·阳性血清第31页
     ·实验动物第31页
     ·主要试剂第31页
     ·溶液配制第31-32页
     ·主要仪器第32-33页
     ·病毒的分离第33页
     ·细菌分离第33页
     ·血凝试验第33页
     ·ELD50 的测定第33-34页
     ·血清交叉中和试验第34页
     ·动物回归试验第34页
     ·病毒的RT-PCR 鉴定第34-39页
   ·新型鸭肝炎病毒基因组测定与分析第39-45页
     ·载体与毒(菌)株第39页
     ·主要试剂第39页
     ·引物的设计与合成第39页
     ·病毒RNA 的提取第39页
     ·普通RT-PCR 扩增病毒基因组中间区域分段第39-41页
     ·病毒基因组5'末端和3'末端序列的扩增第41-45页
     ·PCR 扩增产物的回收纯化第45页
     ·目的片段与pMD18-T Vector 的连接第45页
     ·重组质粒的转化第45页
     ·重组质粒DNA 的提取及双酶切鉴定测序第45页
   ·新型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体 的制备第45-54页
     ·载体与毒(菌)株和血清第45-46页
     ·实验动物第46页
     ·主要试剂及仪器第46页
     ·溶液配制第46-47页
     ·引物的设计与合成第47-48页
     ·VP1 基因的扩增第48-49页
     ·VP1 表达载体的构建第49-51页
     ·重组表达质粒在大肠杆菌中的诱导表达第51页
     ·SDS-PAGE第51-52页
     ·Western-blot 分析第52页
     ·重组蛋白的纯化第52-53页
     ·重组菌表达产物多克隆抗血清的制备与鉴定第53-54页
3 结果与分析第54-68页
   ·一株新型DHV 的分离及RT-PCR 鉴定第54-58页
     ·病毒的分离第54页
     ·细菌分离第54页
     ·血凝试验第54页
     ·ELD50 的测定第54-55页
     ·血清交叉中和试验第55页
     ·动物回归试验第55页
     ·RT-PCR 鉴定第55页
     ·序列分析第55-58页
   ·新型鸭肝炎病毒基因组测定与分析第58-64页
     ·PCR 扩增第58页
     ·基因组测序分析第58-60页
     ·进化关系分析第60-64页
   ·新型DHV VP1 基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备第64-68页
     ·VP1 基因的PCR 扩增结果第64页
     ·重组质粒的筛选和酶切鉴定第64-65页
     ·重组菌菌体裂解物的凝胶电泳结果第65-66页
     ·重组表达蛋白的纯化与鉴定第66-67页
     ·多克隆抗体的制备及鉴定第67-68页
4 讨论第68-71页
   ·一株新型DHV 的分离及RT-PCR 鉴定第68页
   ·新型鸭肝炎病毒基因组测定与分析第68-69页
   ·新型DHV VP1 基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备第69-71页
5 结论第71-72页
参考文献第72-80页
致谢第80-81页
攻读硕士学位期间发表论文情况第81页

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