| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 选题的背景及目的意义 | 第11-12页 |
| 1.2 人参皂苷生物合成的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 人参皂苷生物合成途径 | 第12-14页 |
| 1.2.2 人参皂苷生物合成的关键酶基因 DS 与 D12H | 第14页 |
| 1.3 原人参二醇的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.1 原人参二醇的结构 | 第15页 |
| 1.3.2 原人参二醇的抗癌活性研究 | 第15页 |
| 1.4 酿酒酵母表达系统的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.5 多基因共表达的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.5.1 多基因共表达作用 | 第18页 |
| 1.5.2 多基因共表达载体的类型 | 第18-19页 |
| 第2章 人参发根中基因 DS 与 D12H 的克隆与分析 | 第19-34页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第19-22页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.3.1 人参发根的继代培养 | 第22页 |
| 2.3.2 人参发根总 RNA 的提取与模版 cDNA 的合成 | 第22-24页 |
| 2.3.3 人参发根中 DS 与的 D12H 克隆引物的设计 | 第24页 |
| 2.3.4 人参发根中基因 DS 和 D12H 的克隆与纯化 | 第24-26页 |
| 2.3.5 人参发根 DS 和 D12H 基因克隆载体构建、转化和测序 | 第26-28页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第28-31页 |
| 2.4.1 人参发根总 RNA 的提取 | 第28页 |
| 2.4.2 人参发根 DS 和 D12H 基因的克隆与纯化 | 第28-30页 |
| 2.4.3 人参发根 DS 和 D12H 基因克隆载体的构建和鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4.4 人参发根 DS 和 D12H 基因序列测序分析 | 第31页 |
| 2.5 讨论 | 第31-33页 |
| 2.5.1 RNA 的提取 | 第32页 |
| 2.5.2 PCR 条件的优化 | 第32-33页 |
| 2.6 小结 | 第33-34页 |
| 第3章 DS 与 D12H 基因的表达载体构建与遗传转化 | 第34-58页 |
| 3.1 引言 | 第34-35页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第35-38页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-45页 |
| 3.3.1 RNA 的提取、反转录及基因的克隆和回收纯化 | 第38页 |
| 3.3.2 DS 和 D12H 基因酿酒酵母表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.3 感受态酿酒酵母的制备 | 第39-40页 |
| 3.3.4 DS 和 D12H 基因表达载体对酿酒酵母的转染和鉴定 | 第40-42页 |
| 3.3.5 DS 和 D12H 基因在酿酒酵母中的表达鉴定 | 第42-44页 |
| 3.3.6 酿酒酵母工程菌中原人参二醇含量的检测 | 第44-45页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第45-54页 |
| 3.4.1 DS 和 D12H 基因的克隆与纯化 | 第45-47页 |
| 3.4.2 DS 和 D12H 基因酿酒酵母表达载体的构建与鉴定 | 第47-49页 |
| 3.4.3 DS 和 D12H 基因表达载体对酿酒酵母的转染和鉴定 | 第49-52页 |
| 3.4.4 DS 和 D12H 基因在酿酒酵母中的表达鉴定 | 第52-53页 |
| 3.4.5 酿酒酵母工程菌中原人参二醇含量的检测 | 第53-54页 |
| 3.5 讨论 | 第54-57页 |
| 3.5.1 DS 和 D12H 基因表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 3.5.2 酿酒酵母工程菌的构建 | 第55-56页 |
| 3.5.3 酿酒酵母表达蛋白的检测 | 第56页 |
| 3.5.4 原人参二醇含量的检测 | 第56-57页 |
| 3.6 小结 | 第57-58页 |
| 第4章 酿酒酵母工程菌的培养优化 | 第58-65页 |
| 4.1 引言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第58-59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-60页 |
| 4.3.1 酿酒酵母工程菌生长曲线的绘制 | 第59页 |
| 4.3.2 温度调控对工程菌生长情况和原人参二醇含量影响 | 第59页 |
| 4.3.3 培养时间对工程菌生长情况和原人参二醇含量影响 | 第59-60页 |
| 4.3.4 振荡转数对工程菌生长情况和原人参二醇含量影响 | 第60页 |
| 4.3.5 最适温度、培养时间和转速下原人参二醇的产量 | 第60页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第60-63页 |
| 4.4.1 酿酒酵母生长曲线的绘制 | 第60-61页 |
| 4.4.2 温度调控对工程菌生长情况和原人参二醇含量影响 | 第61-62页 |
| 4.4.3 培养时间对工程菌生长情况和原人参二醇含量影响 | 第62页 |
| 4.4.4 振荡转数对工程菌生长情况和原人参二醇含量影响 | 第62-63页 |
| 4.4.5 最适温度、培养时间和转速下原人参二醇的产量 | 第63页 |
| 4.5 讨论与结论 | 第63-65页 |
| 第5章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 结论 | 第65-66页 |
| 5.2 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 科研成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
