| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 绪论 | 第10-16页 |
| 1.1 海洋放线菌 | 第10-12页 |
| 1.1.1 放线菌的概述 | 第10页 |
| 1.1.2 海洋放线菌 | 第10-11页 |
| 1.1.3 海洋放线菌的生物活性天然产物 | 第11-12页 |
| 1.2 非核糖体多肽合成酶(NRPS) | 第12-13页 |
| 1.3 非核糖体多肽合酶腺苷化结构域 | 第13-14页 |
| 1.4 本课题的研究目的和意义 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-36页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第16-22页 |
| 2.1.1 菌株、质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 实验试剂的配制 | 第16-21页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.5 主要分子生物学数据库和软件 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-36页 |
| 2.2.1 基因的生物信息学分析 | 第22页 |
| 2.2.2 Salinispora arenicola CNS-205基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.3 重组表达载体pGEX-KG-sare0357的构建 | 第23-26页 |
| 2.2.4 重组表达载体pGEX-KG-sare0357的鉴定 | 第26-28页 |
| 2.2.5 目的蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| 2.2.6 Sare0357包涵体的变性、纯化、Western blotting鉴定 | 第28-31页 |
| 2.2.7 pET-28a-sare0357诱导表达融合蛋白(Sare0357)的复性及其酶活测定 | 第31-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-52页 |
| 3.1 sare0357基因的生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 3.1.1 基本理化性质分析 | 第36页 |
| 3.1.2 Sare0357蛋白的疏水性、信号肽、关键结构域与二级结构组成 | 第36-37页 |
| 3.1.3 Sare0357蛋白的特异性底物预测 | 第37页 |
| 3.2 目的基因sare0357的PCR扩增 | 第37页 |
| 3.3 构建与鉴定重组表达质粒 | 第37-40页 |
| 3.3.1 重组表达质粒pGEX-KG-sare0357的构建与鉴定 | 第37-39页 |
| 3.3.2 重组表达载体pET-28a-sare0357的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4 目的蛋白的诱导表达 | 第40-41页 |
| 3.4.1 重组表达载体pGEX-KG-sare0357的诱导表达 | 第40页 |
| 3.4.2 重组表达载体pET-28a-sare0357的诱导表达 | 第40-41页 |
| 3.5 Sare0357包涵体的变性、纯化及Western blotting鉴定 | 第41-43页 |
| 3.5.1 Sare0357包涵体的变性 | 第41-42页 |
| 3.5.2 Sare0357变性蛋白的纯化及Western blotting鉴定 | 第42-43页 |
| 3.6 Sare0357变性蛋白的复性及其酶活测定 | 第43-52页 |
| 3.6.1 Sare0357融合蛋白的梯度浓度透析复性 | 第43-46页 |
| 3.6.2 酶活测定方法的选择 | 第46页 |
| 3.6.3 Sare0357融合蛋白特异性底物的筛选 | 第46-48页 |
| 3.6.4 基本酶动力学参数的测定 | 第48-52页 |
| 第四章 论文总结 | 第52-55页 |
| 4.1 讨论 | 第52-53页 |
| 4.2 总结 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
