| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 产黄青霉简介 | 第12-14页 |
| 1.1.1 产黄青霉合成途径 | 第12-13页 |
| 1.1.2 青霉素的作用机理 | 第13页 |
| 1.1.3 产黄青霉的遗传改造 | 第13-14页 |
| 1.2 丝状真菌基因操作方法 | 第14-18页 |
| 1.2.1 丝状真菌DNA损伤修复机制 | 第14-15页 |
| 1.2.2 原生质体转化法 | 第15页 |
| 1.2.3 电转化 | 第15-16页 |
| 1.2.4 RNA干扰技术 | 第16页 |
| 1.2.5 农杆菌转化法 | 第16-18页 |
| 1.2.6 基因编辑技术 | 第18页 |
| 1.3 海藻糖代谢途径 | 第18-23页 |
| 1.3.1 海藻糖结构特性 | 第18-19页 |
| 1.3.2 海藻糖的生物合成途径 | 第19-20页 |
| 1.3.3 海藻糖与海藻糖循环代谢 | 第20-23页 |
| 1.4 Scale down与糖浓度应激反应机理研究 | 第23-24页 |
| 1.4.1 恒化培养 | 第23页 |
| 1.4.2 Scale-down研究 | 第23-24页 |
| 1.4.3 糖脉冲应激响应机制 | 第24页 |
| 1.5 本实验研究的目的、内容与意义 | 第24-26页 |
| 第2章 材料与方法 | 第26-42页 |
| 2.1 试验材料 | 第26-33页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 引物 | 第26-27页 |
| 2.1.3 培养基及配方 | 第27-30页 |
| 2.1.4 溶液 | 第30-31页 |
| 2.1.5 试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-42页 |
| 2.2.1 PCR | 第33-34页 |
| 2.2.2 DNA酶切和连接 | 第34-35页 |
| 2.2.3 E.coli DH5α感受态细胞制备 | 第35-36页 |
| 2.2.4 重组质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第36页 |
| 2.2.5 A.tumefaciens AGL1感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2.2.6 重组质粒的电击转化农杆菌AGL-1 | 第36-37页 |
| 2.2.7 细菌菌落/菌液PCR | 第37页 |
| 2.2.8 细菌质粒抽提 | 第37页 |
| 2.2.9 核酸电泳 | 第37页 |
| 2.2.10 胶回收 | 第37页 |
| 2.2.11 产黄青霉农杆菌共培养 | 第37-38页 |
| 2.2.12 产黄青霉基因组的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.13 产黄青霉总RNA抽提 | 第39页 |
| 2.2.14 q-PCR | 第39页 |
| 2.2.15 产黄青霉孢子的制备 | 第39页 |
| 2.2.16 5 L发酵罐连续培养 | 第39-40页 |
| 2.2.17 快速取样方法 | 第40页 |
| 2.2.18 生物量,PMV测量方法 | 第40页 |
| 2.2.19 葡萄糖浓度测量方法 | 第40-41页 |
| 2.2.20 摄氧率(OUR)和二氧化碳生成速率(CER)测定 | 第41页 |
| 2.2.21 胞外PAA, PenG检测方法 | 第41页 |
| 2.2.22 LC-MS/MS分析胞内代谢物 | 第41-42页 |
| 第3章 P. chrysogenum海藻糖循环途径突变株的构建 | 第42-61页 |
| 3.1 引言 | 第42-43页 |
| 3.2 海藻糖6磷酸合成酶突变株P.chrysogenum -△tps1的构建 | 第43-51页 |
| 3.2.1 双源表达载体pGreenⅡ-Atps1的构建 | 第43-48页 |
| 3.2.2 pGreenⅡ-△tps1转化农杆菌AGL-1 | 第48-49页 |
| 3.2.3 P.chrysogenum-△tps1转化子筛选 | 第49-51页 |
| 3.3 海藻糖六磷酸磷酸酯酶突变株P.chrysogenum-△tps2的构建 | 第51-56页 |
| 3.3.1 双元表达载体pGreenⅡ-Atps2的构建 | 第51-54页 |
| 3.3.2 pGreenⅡ-△tps2转化农杆菌AGL-1 | 第54-55页 |
| 3.3.3 P.chrysogenum -△tps2转化子的筛选 | 第55-56页 |
| 3.4 转化子q-PCR验证 | 第56-57页 |
| 3.5 P. chrysogenum Wisconsin 54-1255,P. chrysogenum -△tps1,P.chrysogenum -△tps2菌形比较 | 第57-59页 |
| 3.5.1 Wisconsin 54-1255,P. chrysogenum -△tps1,P. chrysogenum-△tps2特征 | 第57-59页 |
| 3.5.2 糖浓度耐受试验 | 第59页 |
| 3.6 本章小结 | 第59-61页 |
| 第4章 Wisconsin54-1255,P. chrysogenum -△tps1,P. chrysogenum-△tps2生理代谢特性研究 | 第61-67页 |
| 4.1 前言 | 第61-62页 |
| 4.2 Wisconsin54-1255,P. chrysogenum -△tps1,P. chrysogenum -△tps2恒化培养实验 | 第62-67页 |
| 4.2.1 分批发酵 | 第63-65页 |
| 4.2.2 恒化培养 | 第65-67页 |
| 第5章 产黄青霉Wisconsin 54-1255与工业菌种DS17690生理参数的比较 | 第67-71页 |
| 5.1 前言 | 第67页 |
| 5.2 DS17690恒化培养 | 第67页 |
| 5.3 海藻糖循环途径代谢分析 | 第67-71页 |
| 第6章 结论与展望 | 第71-73页 |
| 6.1 结论 | 第71-72页 |
| 6.2 展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附件 | 第81-83页 |
