| 中文摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-18页 |
| 参考文献 | 第14-18页 |
| 第一部分 跨损伤DNA合成通路基因在食管鳞癌组织中的表达 | 第18-36页 |
| 一、材料 | 第19-22页 |
| 1. 组织样本 | 第19页 |
| 2. 试剂 | 第19-20页 |
| 3. 引物 | 第20-21页 |
| 4. 仪器 | 第21-22页 |
| 二、方法 | 第22-25页 |
| 1. 采用Trizol法提取食管癌和正常上皮组织中的总RNA | 第22页 |
| 2. RNA浓度测定 | 第22-23页 |
| 3. 基因组DNA消化 | 第23页 |
| 4. mRNA反转录为cDNA | 第23-24页 |
| 5. 荧光实时定量PCR(real-time PCR)检测目的基因表达 | 第24页 |
| 6. 免疫组织化学 | 第24-25页 |
| 7. 统计学分析 | 第25页 |
| 三、结果 | 第25-29页 |
| 1. 标本资料及组织病理学特征 | 第25-26页 |
| 2. RNA质量及PCR产物检测 | 第26-28页 |
| 3. TLS通路基因在食管鳞癌组织中的表达 | 第28-29页 |
| 4. Polι在食管鳞癌组织中的蛋白表达 | 第29页 |
| 四、讨论 | 第29-31页 |
| 五、参考文献 | 第31-36页 |
| 第二部分 POLι在食管鳞癌组织中过表达的机制 | 第36-71页 |
| 一、材料 | 第37-40页 |
| 1. 细胞系、质粒 | 第37页 |
| 2. 试剂 | 第37-39页 |
| 3. 仪器 | 第39-40页 |
| 二、方法 | 第40-52页 |
| 1. DNA甲基化实验 | 第40-44页 |
| 2. 细胞培养 | 第44-45页 |
| 3. 去甲基化实验 | 第45页 |
| 4. 组蛋白乙酰化调控Polι表达检测 | 第45-46页 |
| 5. 启动子报告质粒的构建 | 第46-48页 |
| 6. 细胞转染和荧光素酶分析 | 第48-49页 |
| 7. Polι基因与Sp1、Oct-1基因mRNA表达水平的相关性 | 第49-50页 |
| 8. 染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP) | 第50-52页 |
| 9. 数据分析 | 第52页 |
| 三、结果 | 第52-64页 |
| 1. Polι基因表达差异与启动子区甲基化水平的关系 | 第52-56页 |
| 2. Polι基因表达差异与组蛋白乙酰化的关系 | 第56-57页 |
| 3. Polι基因表达差异与启动子区作用元件的关系 | 第57-59页 |
| 4. Polι基因表达与转录因子Sp1、Oct-1的关系 | 第59-61页 |
| 5. Polι基因与Sp1、Oct-1基因mRNA表达水平的相关性 | 第61-62页 |
| 6. RNA聚合酶Ⅱ、Sp1、Oct-1与Polι基因启动子的相对结合量分析 | 第62-64页 |
| 四、讨论 | 第64-67页 |
| 五、参考文献 | 第67-71页 |
| 第三部分 POL I对食管鳞癌细胞放化疗敏感性的影响 | 第71-90页 |
| 一、材料 | 第72-73页 |
| 1. 试剂 | 第72-73页 |
| 2. 仪器 | 第73页 |
| 二、方法 | 第73-77页 |
| 1. 构建Polι过表达载体 | 第73-74页 |
| 2. 构建基因沉默载体 | 第74页 |
| 3. 细胞转染 | 第74页 |
| 4. Polι对食管鳞癌细胞株Eca-109增殖的影响 | 第74-75页 |
| 5. Polι对食管癌细胞Eca-109铂类敏感性的影响 | 第75页 |
| 6. Polι对食管鳞癌细胞Eca-109放射敏感性的影响 | 第75-76页 |
| 7. Polι对辐射后食管鳞癌细胞Eca-109细胞周期的影响 | 第76-77页 |
| 8. 统计学处理 | 第77页 |
| 三、结果 | 第77-84页 |
| 1. 建立Polι基因过表达载体 | 第77-79页 |
| 2. Polι基因对食管鳞癌细胞Eca-109增殖的影响 | 第79-81页 |
| 3. Polι对食管鳞癌细胞Eca-109铂类敏感性的影响 | 第81-82页 |
| 4. Polι对食管癌细胞株Eca-109放射敏感性的影响 | 第82-83页 |
| 5. Polι对辐射后食管鳞癌细胞Eca-109细胞周期的影响 | 第83-84页 |
| 四、讨论 | 第84-86页 |
| 五、参考文献 | 第86-90页 |
| 全文总结 | 第90-92页 |
| 综述 | 第92-113页 |
| 参考文献 | 第102-113页 |
| 英文缩略词表 | 第113-115页 |
| 攻读学位期间获课题和公开发表的论文 | 第115-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
