| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 植物脂质合成代谢途径概述 | 第11-12页 |
| 1.2 甘油磷酸酰基转移酶(GPAT)和溶血磷脂酸酰基转移酶(LPAAT)在脂代谢中的作用 | 第12-14页 |
| 1.2.1 GPAT在脂代谢中的作用 | 第12-13页 |
| 1.2.2 LPAAT在脂代谢中的作用 | 第13-14页 |
| 1.3 GPAT的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.1 GPAT与植物抗寒能力 | 第14页 |
| 1.3.2 GPAT对植物胞外脂质蜡质合成及表面通透性的影响 | 第14-15页 |
| 1.3.3 质体甘油三磷酸酰基转移酶在植物生长发育中的作用 | 第15页 |
| 1.4 LPAAT的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4.1 LPAAT在动物中的研究进展 | 第15页 |
| 1.4.2 LPAAT在植物中的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5 本研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.4 常用仪器 | 第18页 |
| 2.1.5 引物设计与合成 | 第18-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第20页 |
| 2.2.2 植物DNA的提取及PCR | 第20页 |
| 2.2.3 植物组织RNA提取及反转录PCR | 第20-21页 |
| 2.2.4 基因克隆、超表达及RNAi抑制表达载体的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.5 大肠杆菌DH5α(含目的基因表达载体质粒)的培养及质粒提取 | 第22页 |
| 2.2.6 农杆菌介导的油菜遗传转化 | 第22-23页 |
| 2.2.7 转化再生植株阳性检测 | 第23-24页 |
| 2.2.8 原核表达载体的构建及蛋白表达 | 第24页 |
| 2.2.9 突变体的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.10 油菜叶片脂类物质的提取及分析 | 第25页 |
| 2.2.11 油菜种子脂类物质的提取及分析 | 第25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-40页 |
| 3.1 甘蓝型油菜BnGPAT和BnLPAAT生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 3.2 油菜中GPAT和LPAAT基因的克隆和转化 | 第26-29页 |
| 3.2.1 油菜GPAT9、ATS1基因的克隆和转化 | 第26-27页 |
| 3.2.2 油菜ATS2(LPAAT1)、LPAAT2、LPAAT3和LPAAT5基因的克隆和转化 | 第27-29页 |
| 3.3 超表达植株的获得及鉴定 | 第29-31页 |
| 3.3.1 DNA水平上的检测 | 第29-30页 |
| 3.3.2 半定量检测 | 第30-31页 |
| 3.4 油菜BnATS1、BnGPAT9和BnLPAAT2表达谱分析 | 第31-34页 |
| 3.5 油菜BnATS1、BnGPAT9和BnLPAAT2在油脂合成代谢中的作用 | 第34-37页 |
| 3.6 超表达BnATS1、BnGPAT9和BnLPAAT2对相关基因表达的影响 | 第37-38页 |
| 3.7 油菜GPAT和LPAAT家族蛋白的原核表达 | 第38-39页 |
| 3.8 拟南芥GPAT和LPAAT相关基因的突变体分离鉴定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 附录 | 第47-48页 |
| Protocol 1：油菜叶片脂类的提取 | 第47页 |
| Protocol 2：TLC及甲酯化 | 第47-48页 |
| Protocol 3：农杆菌介导转基因油菜转化试剂及培养基 | 第48页 |
