| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 综述 | 第10-19页 |
| 1. 猪细小病毒概述 | 第10-13页 |
| ·猪细小病毒的发现和病原学特性 | 第10-11页 |
| ·猪细小病毒病的发生与流行特点 | 第11页 |
| ·猪细小病毒基因组的编码蛋白 | 第11-12页 |
| ·结构蛋白 | 第11-12页 |
| ·非结构蛋白 | 第12页 |
| ·猪细小病毒病疫苗研究进展 | 第12-13页 |
| ·PPV灭活疫苗 | 第12-13页 |
| ·PPV弱毒疫苗 | 第13页 |
| ·PPV核酸疫苗 | 第13页 |
| 2. 猪圆环病毒概述 | 第13-18页 |
| ·猪圆环病毒的发现和病原学特性 | 第13-14页 |
| ·猪圆环病毒病的发生与流行特点 | 第14-15页 |
| ·猪圆环病毒病基因组的编码蛋白 | 第15-16页 |
| ·REP蛋白 | 第15页 |
| ·CAP蛋白 | 第15-16页 |
| ·ORF3基因 | 第16页 |
| ·猪圆环病毒病疫苗研究进展 | 第16-18页 |
| ·PCV灭活疫苗 | 第17页 |
| ·PCV弱毒疫苗 | 第17页 |
| ·PCV核酸疫苗 | 第17-18页 |
| 3. 实验目的及意义 | 第18-19页 |
| 实验部分 | 第19-49页 |
| 1. 材料与方法 | 第19-20页 |
| ·实验材料 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| 2. 方法 | 第20-31页 |
| 2. PPV VP2基因的PCR、克隆及鉴定 | 第20-22页 |
| ·VP2基因的引物设计及合成 | 第20页 |
| ·PPV病毒基因组DNA的提取 | 第20页 |
| ·VP2基因的PCR扩增 | 第20-21页 |
| ·VP2基因的回收 | 第21页 |
| ·VP2基因的克隆及鉴定 | 第21-22页 |
| ·PCV2 ORF2抗原优势区基因A、B、C的PCR、克隆及鉴定 | 第22-24页 |
| ·抗原优势区基因的引物设计 | 第22页 |
| ·质粒PMD-ORF2的抽提 | 第22-23页 |
| ·抗原优势区基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·抗原优势区基因的回收 | 第24页 |
| ·抗原优势区基因的克隆及鉴定 | 第24页 |
| ·含PPV VP2基因和PCV2 ORF2抗原优势区基因重组质粒的构建 | 第24-25页 |
| ·VP2基因的酶切回收 | 第24页 |
| ·含PCV2 ORF2抗原优势区基因的PMD19-T SIMPLE VECTOR开环载体的准备 | 第24-25页 |
| ·PPV VP2基因和PCV2 ORF2抗原优势区基因的连接及转化 | 第25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25页 |
| ·含PPV VP2基因、PCV2 ORF2抗原优势区基因真核表达质粒的构建 | 第25-26页 |
| ·VP2-A、VP2-B、VP2-C基因片段的酶切回收 | 第25页 |
| ·质粒PCI-NEO酶切回收 | 第25页 |
| ·连接与转化 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26页 |
| ·PCI-A-VP2、PCI-B-VP2、PCI-C-VP2质粒DNA转染VERO细胞 | 第26-27页 |
| ·去内毒素的质粒PCI-A-VP2、PCI-B-VP2、PCI-C-VP2的抽提 | 第26页 |
| ·PCI-A-VP2、PCI-B-VP2、PCI-C-VP2质粒DNA的转染 | 第26-27页 |
| ·转染后表达产物的检测 | 第27页 |
| ·重组质粒的免疫原性 | 第27-30页 |
| ·质粒DNA的大量抽提与纯化 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA的免疫 | 第28页 |
| ·样品的采集 | 第28-29页 |
| ·脾脏淋巴细胞的转化实验 | 第29页 |
| ·T淋巴细胞数量的动态变化检测 | 第29页 |
| ·PPV、PCV2抗体检测 | 第29-30页 |
| ·重组质粒在小鼠体内的分布及存留时间的检测 | 第30页 |
| ·样品总DNA的抽提 | 第30页 |
| ·PCR检测 | 第30页 |
| ·重组质粒在小鼠体内的安全性检测 | 第30-31页 |
| ·组织DNA的分离、纯化 | 第30-31页 |
| ·PCR检测 | 第31页 |
| 3. 结果与分析 | 第31-43页 |
| ·PMD-VP2的构建 | 第31-32页 |
| ·PPV VP2基因的PCR扩增 | 第31页 |
| ·PMD-VP2的酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·序列测定 | 第32页 |
| ·PMD-A、PMD-B、PMD-C的构建 | 第32-33页 |
| ·PCV2 ORF2抗原优势区基因的PCR扩增 | 第32页 |
| ·酶切鉴定 | 第32页 |
| ·序列测定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒PMD-A-VP2、PMD-B-VP2、PMD-C-VP2的构建 | 第33页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第33页 |
| ·含PPV VP2基因和PCV2 ORF2抗原优势区基因PCI-A-VP2、PCI-B-VP2、PCI-C-VP2表达质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·序列测定 | 第34页 |
| ·PCI-A-VP2、PCI-B-VP2、PCI-C-VP2质粒DNA转染VERO细胞的间接免疫荧光检测 | 第34-35页 |
| ·重组质粒免疫原性研究 | 第35-41页 |
| ·脾脏淋巴细胞的转化实验 | 第35-36页 |
| ·T淋巴细胞数量的动态变化检测 | 第36-39页 |
| ·PCV2抗体检测 | 第39-40页 |
| ·PPV抗体检测 | 第40-41页 |
| ·重组质粒在小鼠体内的分布检测结果 | 第41-43页 |
| ·重组质粒在小鼠体内的安全性检测结果 | 第43页 |
| 4. 讨论 | 第43-47页 |
| ·目的基因的选择 | 第43-44页 |
| ·真核表达载体的选择 | 第44页 |
| ·重组质粒的转染和表达产物检测 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的免疫原性 | 第45-46页 |
| ·细胞免疫 | 第45-46页 |
| ·体液免疫 | 第46页 |
| ·质粒DNA的分布和安全性检测 | 第46-47页 |
| ·重组质粒DNA的分布检测 | 第46-47页 |
| ·重组质粒DNA的安全性检测 | 第47页 |
| 5. 结论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
