| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 迟缓爱德华氏菌 | 第10-14页 |
| 1.1.1 迟缓爱德华氏菌的致病性 | 第10页 |
| 1.1.2 迟缓爱德华氏菌致病机制 | 第10-12页 |
| 1.1.3 迟缓爱德华氏菌的毒力调控网络 | 第12-14页 |
| 1.2 组蛋白样类核结构蛋白H-NS | 第14-21页 |
| 1.2.1 H-NS的结构与功能 | 第14-16页 |
| 1.2.2 H-NS对DNA序列的识别 | 第16页 |
| 1.2.3 H-NS抑制转录的机制 | 第16-18页 |
| 1.2.4 H-NS对毒力相关基因的调控 | 第18-20页 |
| 1.2.5 H-NS调控受温度的影响 | 第20-21页 |
| 1.3 本论文的研究内容和意义 | 第21-22页 |
| 第2章 利用双向电泳技术筛选受H-NS调控的蛋白 | 第22-30页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.2.1 菌种、质粒及培养基 | 第22页 |
| 2.2.2 主要试剂与仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2.3 分析软件与技术服务 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.3.1 胞外分泌蛋白的抽提 | 第23页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE电泳 | 第23-24页 |
| 2.3.3 双向电泳 | 第24-25页 |
| 2.3.4 差异蛋白点鉴定 | 第25-26页 |
| 2.4 实验结果 | 第26-27页 |
| 2.4.1 胞外蛋白谱差异分析 | 第26页 |
| 2.4.2 野生株和H-NS突变株的比较蛋白组学分析 | 第26-27页 |
| 2.5 讨论 | 第27-29页 |
| 2.6 本章小结 | 第29-30页 |
| 第3章 H-NS对T6SS效应子EvpB和EvpC的调控机制研究 | 第30-41页 |
| 3.1 前言 | 第30页 |
| 3.2 实验材料 | 第30-31页 |
| 3.2.1 菌种、质粒、引物及培养基 | 第30-31页 |
| 3.2.2 主要试剂与仪器设备 | 第31页 |
| 3.2.3 分析软件与技术服务 | 第31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.3.1 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第31-32页 |
| 3.3.2 evpB和evpC ORF区域序列结构分析 | 第32-33页 |
| 3.3.3 evpB和evpC编码区域的分段及扩增 | 第33页 |
| 3.3.4 H-NS1505的诱导表达及纯化 | 第33页 |
| 3.3.5 电泳迁移率实验(EMSA)分析 | 第33-34页 |
| 3.3.6 DNase I footprinting实验 | 第34页 |
| 3.4 实验结果 | 第34-39页 |
| 3.4.1 H-NS1505对evpB和evpC转录水平的调控 | 第34-35页 |
| 3.4.2 H-NS1505对T6SS效应子的调控 | 第35页 |
| 3.4.3 evpB和evpC ORF区域序列分析 | 第35-36页 |
| 3.4.4 H-NS1505结合序列分析 | 第36-37页 |
| 3.4.5 H-NS1505高亲和性序列分析 | 第37-39页 |
| 3.5 讨论 | 第39-40页 |
| 3.6 本章小结 | 第40-41页 |
| 第4章 H-NS结合DNA功能相关氨基酸的突变及受温度的影响 | 第41-47页 |
| 4.1 前言 | 第41页 |
| 4.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.3 实验方法 | 第42-43页 |
| 4.3.1 E.coli BL21(DE3)感受态制备 | 第42-43页 |
| 4.3.2 氨基酸定点突变 | 第43页 |
| 4.3.3 蛋白纯化 | 第43页 |
| 4.3.4 电泳迁移率实验(EMSA)分析 | 第43页 |
| 4.4 实验结果 | 第43-44页 |
| 4.4.1 H-NS蛋白C端功能域保守性分析 | 第43-44页 |
| 4.4.2 Q84A和R86A突变对H-NS 1505结合能力的影响 | 第44页 |
| 4.4.3 温度对H-NS1505结合能力的影响 | 第44页 |
| 4.5 讨论 | 第44-46页 |
| 4.6 本章小结 | 第46-47页 |
| 第5章 H-NS蛋白对E.tarda侵染宿主细胞的影响 | 第47-51页 |
| 5.1 前言 | 第47页 |
| 5.2 实验材料 | 第47-48页 |
| 5.2.1 菌株、质粒 | 第47-48页 |
| 5.2.2 主要试剂及培养基 | 第48页 |
| 5.3 实验方法 | 第48-49页 |
| 5.3.1 细胞复苏及培养 | 第48页 |
| 5.3.2 细菌黏附及内化能力测定 | 第48-49页 |
| 5.4 实验结果 | 第49-50页 |
| 5.5 讨论 | 第50页 |
| 5.6 本章小结 | 第50-51页 |
| 第6章 结论与展望 | 第51-53页 |
| 6.1 结论 | 第51页 |
| 6.2 展望 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 攻读硕士学位期间撰写的论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
