| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1 骨骼肌形成的分子调控机制 | 第10-12页 |
| 1.1 骨骼肌发育相关的基因家族 | 第10页 |
| 1.2 骨骼肌形成的上游调控因子—Pax家族 | 第10-11页 |
| 1.3 MicroRNA在骨骼肌发育中的功能 | 第11-12页 |
| 2 LncRNA的功能及作用机制 | 第12-19页 |
| 2.1 LncRNAs的功能 | 第12-14页 |
| 2.1.1 调控等位基因的表达：X染色体失活 | 第12页 |
| 2.1.2 调控等位基因的表达：基因印记 | 第12-13页 |
| 2.1.3 在发育中的作用 | 第13-14页 |
| 2.1.4 在癌症中的作用 | 第14页 |
| 2.2 LncRNA的作用机制 | 第14-19页 |
| 2.2.1 增强子RNA与染色质成环 | 第15-16页 |
| 2.2.2 印记基因中的lncRNA | 第16-17页 |
| 2.2.3 LncRNA的剂量补偿效应 | 第17页 |
| 2.2.4 反义lncRNA转录抑制基因表达 | 第17-18页 |
| 2.2.5 LncRNA的自调控 | 第18-19页 |
| 3 MARP家族中ANKRD23的研究进展 | 第19-22页 |
| 第二章 目的意义 | 第22-23页 |
| 第三章 材料和方法 | 第23-40页 |
| 1 实验材料 | 第23-28页 |
| 1.1 实验样品 | 第23页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第23-24页 |
| 1.3 主要试剂与试剂盒 | 第24-25页 |
| 1.4 试剂配制 | 第25-26页 |
| 1.5 应用的生物信息学网站及分析软件 | 第26-27页 |
| 1.6 载体 | 第27-28页 |
| 2 试验方法 | 第28-40页 |
| 2.1 细胞培养 | 第28-29页 |
| 2.1.1 细胞的复苏 | 第28页 |
| 2.1.2 C2C12细胞的增殖培养 | 第28页 |
| 2.1.3 C2C12细胞的分化培养 | 第28-29页 |
| 2.1.4 细胞的冻存 | 第29页 |
| 2.2 C2C12细胞总RNA的提取和cDNA的制备 | 第29-30页 |
| 2.3 AK004293超表达载体的构建 | 第30-34页 |
| 2.3.1 小鼠AK004293 cDNA的克隆 | 第30-32页 |
| 2.3.2 琼脂糖凝胶电泳和成像 | 第32页 |
| 2.3.3 PCR产物的胶回收和克隆测序 | 第32-34页 |
| 2.3.4 质粒提取 | 第34页 |
| 2.3.5 pcDNA3.1-AK004293真核表达载体的酶切鉴定 | 第34页 |
| 2.4 ANKRD23超表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.5 AK004293-siRNA干涉片段的选取 | 第35页 |
| 2.6 脂质体介导的细胞转染(6 孔板) | 第35-36页 |
| 2.7 Quantitative real-time PCR分析 | 第36-37页 |
| 2.8 Western blotting分析 | 第37-40页 |
| 2.8.1 蛋白提取 | 第37页 |
| 2.8.2 BCA蛋白浓度测定 | 第37页 |
| 2.8.3 SDS-PAGE电泳 | 第37-38页 |
| 2.8.4 转膜 | 第38页 |
| 2.8.5 封闭 | 第38页 |
| 2.8.6 免疫反应 | 第38页 |
| 2.8.7 ECL化学发光检测 | 第38-40页 |
| 第四章 结果与分析 | 第40-49页 |
| 1 ANKRD23与AK004293在成肌细胞分化过程中的表达变化 | 第40-41页 |
| 1.1 RNA水平的表达变化 | 第40页 |
| 1.2 蛋白水平的表达变化 | 第40-41页 |
| 2 AK004293的干扰片段筛选 | 第41-42页 |
| 3 siRNA对AK004293基因的干扰效果及其对肌细胞分化标志基因表达的影响 | 第42-43页 |
| 4 pcDNA3.1-AK004293载体构建及其对肌细胞分化标志基因表达的影响 | 第43-45页 |
| 4.1 AK004293超表达载体的鉴定 | 第43页 |
| 4.2 超表达AK004293后肌细胞分化标志基因表达量的变化 | 第43-45页 |
| 5 siRNA对ANKRD23基因的干扰效果及及其对肌细胞分化标志基因表达的影响 | 第45-47页 |
| 6 pcDNA3.1-ANKRD23载体构建及其对肌细胞分化标志基因表达的影响 | 第47-49页 |
| 6.1 ANKRD23超表达载体的鉴定 | 第47页 |
| 6.2 超表达ANKRD23后肌细胞分化标志基因表达量的变化 | 第47-49页 |
| 第五章 讨论 | 第49-52页 |
| 1 关于ANKRD23及与其 3’ UTR重叠的lncRNA AK004293之间的关系 | 第49-50页 |
| 2 关于RNAi技术 | 第50页 |
| 3 关于干扰和超表达ANKRD23对成肌细胞分化的影响 | 第50-51页 |
| 4 下一步计划 | 第51-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
