| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 问题的由来 | 第12页 |
| 1.2 非编码小RNAs的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.2.1 miRNAs | 第13-14页 |
| 1.2.2 piRNAs | 第14-16页 |
| 1.2.3 snoRNAs | 第16-17页 |
| 1.3 tRNA的简介 | 第17-20页 |
| 1.3.1 tRNA的结构与功能 | 第17-18页 |
| 1.3.2 tRNA应激与剪切 | 第18-20页 |
| 1.4 生理状态下tRNA的剪切 | 第20-22页 |
| 1.4.1 精子形成的概述 | 第20-21页 |
| 1.4.2 mse-tRNAs的产生 | 第21-22页 |
| 1.5 tRNA甲基化修饰及其功能 | 第22-27页 |
| 1.5.1 DNM2简介 | 第25页 |
| 1.5.2 DNM2的生物学功能 | 第25-27页 |
| 2 研究目的与意义 | 第27-28页 |
| 3 材料与方法 | 第28-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 3.1.1 实验动物组织及细胞 | 第28页 |
| 3.1.2 主要试剂及药品 | 第28页 |
| 3.1.3 引物 | 第28-29页 |
| 3.1.4 常用培养基 | 第29页 |
| 3.1.5 主要缓冲液 | 第29-31页 |
| 3.1.5.1 SDS-PAGE缓冲液 | 第29-30页 |
| 3.1.5.2 Western blot缓冲液 | 第30页 |
| 3.1.5.3 Northern Blot缓冲液 | 第30-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-39页 |
| 3.2.1 小鼠成熟精子的获取 | 第31页 |
| 3.2.2 DNMT2蛋白水平的表达特征及定位 | 第31-34页 |
| 3.2.2.1 Western-blot | 第31-32页 |
| 3.2.2.2 HE染色和SABC法免疫组化操作步骤： | 第32-34页 |
| 3.2.3 DNMT2在转录水平的表达特征及定位 | 第34-37页 |
| 3.2.3.1 DNMT2的cDNA文库构建与检测 | 第34-36页 |
| 3.2.3.2 冰冻切片RNA原位杂交 | 第36-37页 |
| 3.2.4 tRNA稳定性的检测 | 第37-39页 |
| 3.2.4.1 tRNA的提取 | 第37-38页 |
| 3.2.4.2 Northern Blot | 第38-39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-53页 |
| 4.1 小鼠精子的收集 | 第39-40页 |
| 4.1.1 小鼠睾丸与附睾中精子发生不同阶段的形态特征 | 第39-40页 |
| 4.1.2 小鼠成熟精子大量获取 | 第40页 |
| 4.2 小鼠成熟精子tRNA稳定性检测 | 第40-43页 |
| 4.2.1 尿素胶检测tRNA完整性 | 第40-41页 |
| 4.2.2 Northern Blot检测tRNA稳定性 | 第41-43页 |
| 4.3 DNMT2蛋白水平的定位表达特征 | 第43-49页 |
| 4.3.1 小鼠各组织及精子中DNMT2蛋白的定位表达 | 第43-46页 |
| 4.3.2 小鼠卵巢中DNMT2蛋白的表达特征 | 第46页 |
| 4.3.3 猪的成熟精子和部分组织中DNMT2蛋白的表达 | 第46-48页 |
| 4.3.4 小鼠精子及各组织中DNMT2蛋白水平的表达特征 | 第48-49页 |
| 4.4 DNMT2转录水平的定位表达特征 | 第49-51页 |
| 4.4.1 DNMT2转录水平的表达 | 第49-50页 |
| 4.4.2 DNMT2转录水平的表达定位 | 第50-51页 |
| 4.5 小鼠精子DNA的m5C修饰的检测 | 第51-53页 |
| 5 讨论 | 第53-57页 |
| 5.1 小鼠成熟精子获取的关键 | 第55页 |
| 5.2 提取小鼠成熟精子蛋白质和tRNA的探讨 | 第55-56页 |
| 5.3 DNMT2的DNA甲基化修饰 | 第56-57页 |
| 6 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
