| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 引言 | 第13页 |
| 2 转基因动物建系 | 第13-14页 |
| 3 外源基因定位的方法及研究进展 | 第14-16页 |
| 3.1 热不对称交错式PCR法 | 第14-15页 |
| 3.2 反向PCR法 | 第15页 |
| 3.3 荧光原位杂交法 | 第15页 |
| 3.4 连接介导PCR法 | 第15-16页 |
| 4 插入位点效应的研究进展 | 第16-21页 |
| 4.1 甲基化的检测方法及研究进展 | 第17-19页 |
| 4.1.1 限制性酶切PCR | 第17页 |
| 4.1.2 甲基化特异性PCR | 第17-18页 |
| 4.1.3 变性高效液相色谱法 | 第18页 |
| 4.1.4 亚硫酸盐测序PCR | 第18页 |
| 4.1.5 亚硫酸盐PCR-SSCP | 第18-19页 |
| 4.2 拷贝数的检测方法及研究进展 | 第19-21页 |
| 4.2.1 绝对定量PCR法 | 第19-20页 |
| 4.2.2 Southern Blot | 第20页 |
| 4.2.3 CGH芯片 | 第20页 |
| 4.2.4 高密度SNP芯片 | 第20-21页 |
| 4.3 其他插入位点效应及研究进展 | 第21页 |
| 5 研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 第二章 材料方法 | 第23-46页 |
| 1 试验材料 | 第23-26页 |
| 1.1 试验动物 | 第23页 |
| 1.2 载体和质粒 | 第23页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第23-24页 |
| 1.4 主要试剂及试剂盒 | 第24页 |
| 1.5 主要溶液的配制 | 第24-26页 |
| 2 试验方法 | 第26-46页 |
| 2.1 后代阳性转基因鼠的鉴定 | 第26-29页 |
| 2.1.1 小鼠基因组DNA的提取 | 第26-28页 |
| 2.1.2 阳性鼠的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2 转基因鼠基因组外源基因拷贝数的鉴定 | 第29-33页 |
| 2.2.1 小鼠单拷贝基因重组质粒的检测 | 第29页 |
| 2.2.2 PCR扩增产物的检测 | 第29页 |
| 2.2.3 重组质粒的转化 | 第29-30页 |
| 2.2.4 阳性克隆的检测及测序 | 第30页 |
| 2.2.5 将连接目的片段的pGL3-Basic的重组质粒小量提取 | 第30-31页 |
| 2.2.6 转基因鼠基因组内拷贝数的鉴定 | 第31-33页 |
| 2.3 转基因鼠目的基因在RNA水平表达情况的验证 | 第33-35页 |
| 2.3.1 转基因鼠不同组织RNA的提取 | 第33页 |
| 2.3.2 RNA的反转录 | 第33-34页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR分析MyoD转基因鼠不同组织中MyoD基因的表达情况 | 第34-35页 |
| 2.4 转基因鼠目的基因在蛋白水平表达情况的验证 | 第35-37页 |
| 2.4.1 转基因鼠与野生型鼠肌肉组织蛋白的提取 | 第35-36页 |
| 2.4.2 Western blot检测目的蛋白质的表达量 | 第36-37页 |
| 2.5 转基因鼠肌肉组织甘油三酯的测定 | 第37-39页 |
| 2.6 外源基因定位 | 第39-42页 |
| 2.6.1 热不对称交错式PCR | 第39-40页 |
| 2.6.2 PCR扩增产物的检测 | 第40页 |
| 2.6.3 PCR产物的回收及纯化 | 第40-41页 |
| 2.6.4 胶回收产物连接T载体 | 第41页 |
| 2.6.5 连接产物的转化 | 第41页 |
| 2.6.6 阳性克隆的检测及测序 | 第41-42页 |
| 2.7 亚硫酸盐PCR-SSCP | 第42-45页 |
| 2.7.1 外源基因CpG岛分析 | 第42页 |
| 2.7.2 基因组DNA亚硫酸盐处理 | 第42-43页 |
| 2.7.3 亚硫酸盐处理产物PCR扩增 | 第43页 |
| 2.7.4 PCR扩增产物的检测 | 第43页 |
| 2.7.5 PCR产物的回收及纯化 | 第43-44页 |
| 2.7.6 胶回收产物连接T载体 | 第44页 |
| 2.7.7 连接产物的转化 | 第44-45页 |
| 2.7.8 阳性克隆的检测及测序 | 第45页 |
| 2.7.9 测序结果SSCP检测 | 第45页 |
| 2.8 统计学分析 | 第45-46页 |
| 第三章 研究结果与分析 | 第46-63页 |
| 1 PPAR-γ2 阳性转基因鼠的检测 | 第46页 |
| 2 PPAR-γ2 转基因鼠中外源基因稳定遗传的判定 | 第46-47页 |
| 3 肌肉组织中外源基因PPAR-γ2 的表达情况 | 第47页 |
| 4 肌肉组织内甘油三酯的测定 | 第47-48页 |
| 5 TAIL-PCR定位外源基因PPAR-γ2 的结果 | 第48-50页 |
| 6 PPAR-γ2 转基因鼠中外源基因存在的插入位点效应 | 第50-54页 |
| 6.1 PPAR-γ2 转基因鼠中外源基因拷贝数的判定 | 第50-52页 |
| 6.2 PPAR-γ2 转基因鼠中外源基因其他的插入位点效应 | 第52-54页 |
| 7 MyoD阳性转基因鼠的检测 | 第54-55页 |
| 8 MyoD转基因鼠中外源基因稳定遗传的判定 | 第55-56页 |
| 9 MyoD转基因鼠中外源基因MyoD的表达情况 | 第56-57页 |
| 9.1 MyoD转基因鼠中外源基因MyoD的组织表达谱分析 | 第56页 |
| 9.2 肌肉组织中外源基因MyoD的表达情况 | 第56-57页 |
| 10 MyoD转基因鼠中外源基因存在的插入位点效应 | 第57-63页 |
| 10.1 MyoD转基因鼠外源基因拷贝数的判定 | 第57-58页 |
| 10.2 MyoD转基因鼠中外源基因启动子区域的CpG岛甲基化的鉴定 | 第58-61页 |
| 10.3 MyoD转基因鼠外源基因其他插入位点效应的鉴定 | 第61-63页 |
| 第五章 讨论 | 第63-68页 |
| 第六章 结论 | 第68-69页 |
| 1 本试验取得的结果 | 第68页 |
| 2 后期研究设想 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
