| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-32页 |
| 1.1 苏氨酸的性质及应用 | 第10页 |
| 1.2 苏氨酸的生产工艺 | 第10-11页 |
| 1.3 大肠杆菌中苏氨酸合成途径及其代谢调控机制 | 第11-12页 |
| 1.4 转录弱化 | 第12-17页 |
| 1.4.1 转录延伸复合体为专一靶标的调控 | 第12页 |
| 1.4.2 tRNA浓度水平不同引起的调控 | 第12-13页 |
| 1.4.3 游离氨基酸浓度不同引起的调控 | 第13页 |
| 1.4.4 不依赖翻译过程的调控 | 第13-14页 |
| 1.4.5 小分子介导的调控 | 第14页 |
| 1.4.6 转录弱化对生长速率的调控 | 第14-15页 |
| 1.4.7 转录弱化可能引起的其他调控 | 第15页 |
| 1.4.8 未携带氨基酸的转运tRNA引起的调控 | 第15页 |
| 1.4.9 RNA结合蛋白介导的调控 | 第15-17页 |
| 1.5 大肠杆菌苏氨酸操纵子thrL区域结构及其调控机制 | 第17-18页 |
| 1.6 苏氨酸操纵子相关的其他调控机制 | 第18-22页 |
| 1.6.1 m6t6A | 第18-20页 |
| 1.6.2 全局调控因子gcvB蛋白引起的调控 | 第20-21页 |
| 1.6.3 全局调控因子Lrp族蛋白引起的调控 | 第21-22页 |
| 1.7 苏氨酸操纵子相关的其他调控机制 | 第22-23页 |
| 1.8 甘氨酸操纵子及其调控机制 | 第23-24页 |
| 1.9 sRNA及其结构与功能 | 第24-26页 |
| 1.9.1 sRNA的种类 | 第25页 |
| 1.9.2 具有特定调控功能的sRNA | 第25-26页 |
| 1.10 核糖核酸开关 | 第26-28页 |
| 1.10.1 核糖核酸开关的结构与作用机理 | 第26-27页 |
| 1.10.2 人工核糖核酸开关 | 第27-28页 |
| 1.10.3 人工核糖核酸开关的设计原则 | 第28页 |
| 1.11 sRNA和核糖核酸开关应用于代谢工程基因表达调控 | 第28-30页 |
| 1.12 本课题研究意义和主要研究内容 | 第30-32页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第32-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-37页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第32-33页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.3 实验用药品 | 第34页 |
| 2.1.4 主要实验用溶液配制 | 第34-36页 |
| 2.1.5 培养基 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-50页 |
| 2.2.1 菌株培养 | 第37页 |
| 2.2.2 制备大肠杆菌感受态细胞及其转化过程 | 第37-39页 |
| 2.2.3 PCR扩增过程 | 第39-40页 |
| 2.2.4 PCR产物回收 | 第40页 |
| 2.2.5 酶切过程 | 第40-41页 |
| 2.2.6 酶切片段的胶回收 | 第41-42页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第42-43页 |
| 2.2.8 酶连接反应 | 第43页 |
| 2.2.9 大肠杆菌中质粒提取的方法 | 第43-44页 |
| 2.2.10 菌落PCR | 第44-45页 |
| 2.2.11 RT-qPCR | 第45-48页 |
| 2.2.12 蛋白质表达与纯化 | 第48页 |
| 2.2.13 等温滴定量热实验 | 第48-49页 |
| 2.2.14 引物设计与基因测序 | 第49页 |
| 2.2.15 数据测定 | 第49-50页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第50-79页 |
| 3.1 Gcv启动子感应苏氨酸机制的确定 | 第50-58页 |
| 3.1.1 甘氨酸感应器构建 | 第50-52页 |
| 3.1.2 甘氨酸感应器感应环境中不同氨基酸 | 第52-53页 |
| 3.1.3 Gcv A和gcvR蛋白表达系统构建 | 第53-54页 |
| 3.1.4 等温滴定量热实验 | 第54-58页 |
| 3.2 苏氨酸感应器的构建及改造 | 第58-65页 |
| 3.2.1 苏氨酸感应器pLX07-thrL（8）-rfp | 第58-60页 |
| 3.2.2 苏氨酸感应器pLX07-thrL（4）-rfp | 第60-61页 |
| 3.2.3 苏氨酸感应器pLX07-thrL（10）-rfp | 第61-63页 |
| 3.2.4 三种苏氨酸感应器对环境中苏氨酸的感应 | 第63-65页 |
| 3.3 低中高拷贝表达系统下sRNA阻遏研究 | 第65-74页 |
| 3.3.1 sRNA阻遏低拷贝表达系统构建 | 第66-67页 |
| 3.3.2 低拷贝表达系统下sRNA阻遏效率测定 | 第67-68页 |
| 3.3.3 sRNA阻遏中拷贝表达系统构建 | 第68-70页 |
| 3.3.4 中拷贝表达系统下sRNA阻遏效率测定 | 第70-71页 |
| 3.3.5 sRNA阻遏高拷贝表达系统构建 | 第71-72页 |
| 3.3.6 高拷贝表达系统下sRNA阻遏效率测定 | 第72-74页 |
| 3.4 ThrL调控元件与sRNA基因偶联研究 | 第74-79页 |
| 3.4.1 ThrL与sRNA偶联中拷贝表达系统构建 | 第74-75页 |
| 3.4.2 ThrL与sRNA偶联中拷贝表达系统感应苏氨酸 | 第75-76页 |
| 3.4.3 ThrL与sRNA偶联高拷贝表达系统构建 | 第76-78页 |
| 3.4.4 ThrL与sRNA偶联高拷贝表达系统感应苏氨酸 | 第78-79页 |
| 第四章 结论与展望 | 第79-81页 |
| 4.1 实验主要结论 | 第79-80页 |
| 4.2 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
