| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 一. 前言 | 第13-34页 |
| 1 微生物育种方法 | 第13-17页 |
| 1.1 诱变育种 | 第13-15页 |
| 1.1.1 物理诱变 | 第13-14页 |
| 1.1.2 化学诱变 | 第14-15页 |
| 1.2 细胞融合技术 | 第15页 |
| 1.3 基因工程 | 第15-16页 |
| 1.4 基因组重排技术 | 第16页 |
| 1.5 各种育种方法比较 | 第16-17页 |
| 2 原生质体融合研究进展 | 第17-19页 |
| 2.1 原生质体定义 | 第17页 |
| 2.3 原生质体融合技术研究进展 | 第17-19页 |
| 2.3.1 动物细胞融合技术研究进展 | 第18页 |
| 2.3.2 植物原生质体融合技术研究进展 | 第18页 |
| 2.3.3 微生物原生质体融合技术研究进展 | 第18-19页 |
| 2.3.4 原生质体融合技术展望 | 第19页 |
| 3 原生质体融合的技术路线 | 第19-27页 |
| 3.1 原生质体的制备 | 第19-21页 |
| 3.1.1 菌体培养方式 | 第20页 |
| 3.1.2 菌龄 | 第20页 |
| 3.1.3 酶液组成及浓度 | 第20-21页 |
| 3.1.4 酶解时间 | 第21页 |
| 3.1.5 酶解温度 | 第21页 |
| 3.1.6 渗透压稳定剂 | 第21页 |
| 3.2 原生质体再生 | 第21-22页 |
| 3.3 原生质体遗传标记 | 第22-24页 |
| 3.3.1 营养缺陷型标记 | 第22-23页 |
| 3.3.2 抗药性标记 | 第23页 |
| 3.3.3 荧光染色标记 | 第23页 |
| 3.3.4 灭活标记 | 第23-24页 |
| 3.3.5 其他标记 | 第24页 |
| 3.4 标记原生质体融合 | 第24-27页 |
| 3.4.1 生物融合方法 | 第24-25页 |
| 3.4.2 物理融合方法 | 第25页 |
| 3.4.3 化学融合方法 | 第25-27页 |
| 3.4.4 混合法 | 第27页 |
| 4 融合子鉴定 | 第27-30页 |
| 4.1 生物学鉴定 | 第27-28页 |
| 4.1.1 菌落形态 | 第27页 |
| 4.1.2 颉颃实验 | 第27-28页 |
| 4.1.3 菌丝形态比较 | 第28页 |
| 4.1.4 出菇实验 | 第28页 |
| 4.2 生化鉴定法 | 第28-29页 |
| 4.2.1 同工酶酶谱分析 | 第28-29页 |
| 4.2.2 可溶性蛋白质凝胶电泳图谱分析 | 第29页 |
| 4.3 分子生物学鉴定法 | 第29-30页 |
| 4.3.1 RAPD | 第29页 |
| 4.3.2 SRAP | 第29-30页 |
| 4.3.3 ISSR | 第30页 |
| 4.3.4 ITS4 | 第30页 |
| 5 亲本菌株的概述 | 第30-34页 |
| 5.1 酿酒酵母概述 | 第31-32页 |
| 5.1.1 作为饲料添加剂 | 第31页 |
| 5.1.2 在酿酒中的应用 | 第31-32页 |
| 5.2 糙皮侧耳概述 | 第32-33页 |
| 5.2.1 糙皮侧耳药用特性 | 第32页 |
| 5.2.2 糙皮侧耳对农业废弃物的降解 | 第32-33页 |
| 5.3 糙皮侧耳与酿酒酵母融合研究的目的及意义 | 第33-34页 |
| 5.3.1 糙皮侧耳与酿酒酵母融合研究技术路线 | 第33-34页 |
| 二. 双亲菌株原生质体的制备与再生 | 第34-37页 |
| 1 试验材料 | 第34-36页 |
| 1.1 供试菌株 | 第34页 |
| 1.2 试验试剂 | 第34页 |
| 1.3 试验仪器设备 | 第34页 |
| 1.4 培养基 | 第34-35页 |
| 1.5 渗透压稳定剂 | 第35页 |
| 1.6 酶液配制 | 第35-36页 |
| 2 试验方法 | 第36-37页 |
| 2.1 糙皮侧耳原生质体制备和再生 | 第36页 |
| 2.1.1 菌种活化与培养 | 第36页 |
| 2.1.2 预处理 | 第36页 |
| 2.1.3 酶解制备原生质体 | 第36页 |
| 2.1.4 原生质体的再生 | 第36页 |
| 2.2 酿酒酵母原生质体制备和再生（马恒德，2012） | 第36-37页 |
| 2.2.1 菌种活化与培养 | 第36-37页 |
| 2.2.2 预处理 | 第37页 |
| 2.2.3 酶解制备原生质体 | 第37页 |
| 2.2.4 原生质体的再生 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37页 |
| 3.1 糙皮侧耳原生质体的制备与再生 | 第37页 |
| 3.2 酿酒酵母原生质体的制备与再生 | 第37页 |
| 三. 亲本菌株原生质体的灭活标记 | 第37-41页 |
| 1 试验材料 | 第37-38页 |
| 1.1 两亲本菌株原生质体 | 第37页 |
| 1.2 试验试剂 | 第37页 |
| 1.3 试验仪器 | 第37-38页 |
| 1.4 培养基 | 第38页 |
| 1.5 渗稳剂 | 第38页 |
| 2 试验方法 | 第38页 |
| 2.1 糙皮侧耳原生质体的热灭活 | 第38页 |
| 2.2 酿酒酵母原生质体的紫外灭活 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-41页 |
| 3.1 糙皮侧耳热灭活结果 | 第38-39页 |
| 3.2 紫外灭活酵母原生质体结果 | 第39-40页 |
| 3.3 灭活分析 | 第40-41页 |
| 4 小结 | 第41页 |
| 四. 原生质体电融合 | 第41-43页 |
| 1. 试验材料 | 第41页 |
| 1.1 供试菌株 | 第41页 |
| 1.2 试验试剂 | 第41页 |
| 1.3 试验仪器设备 | 第41页 |
| 1.4 培养基 | 第41页 |
| 2 试验方法 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43页 |
| 5 小结 | 第43页 |
| 五. 融合子的鉴定 | 第43-51页 |
| 1 试验材料 | 第43-45页 |
| 1.1 供试菌株 | 第43页 |
| 1.2 试验试剂 | 第43-44页 |
| 1.3 试验仪器设备 | 第44-45页 |
| 1.4 培养基 | 第45页 |
| 2 试验方法 | 第45-47页 |
| 2.1 颉颃试验（王红，2014） | 第45-46页 |
| 2.2 菌丝形态学比较（王淑珍等，2003） | 第46页 |
| 2.3 RAPD分子标记鉴定 | 第46-47页 |
| 2.3.1 基因组DNA的提取 | 第46页 |
| 2.3.2 PCR反应体系及程序（见表5-4和5-5） | 第46-47页 |
| 2.3.3 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第47页 |
| 2.3.4 数据统计与分析 | 第47页 |
| 3 试验结果与分析 | 第47-50页 |
| 3.1 颉颃试验结果 | 第47-48页 |
| 3.2 菌丝形态学比较 | 第48页 |
| 3.3 融合株的分子鉴定 | 第48-50页 |
| 3.3.1 RAPD结果 | 第48-49页 |
| 3.3.2 相似系数分析 | 第49页 |
| 3.3.3 聚类分析 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 5. 小结 | 第51页 |
| 六. 试验需改进的地方 | 第51页 |
| 七. 创新之处 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-62页 |
| 致谢 | 第62页 |