| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 基因治疗概述 | 第11-12页 |
| 1.2 非病毒基因载体(Non-viral Vector) | 第12-14页 |
| 1.2.1 阳离子聚合物(Cationic Polymer) | 第12页 |
| 1.2.2 常见的阳离子聚合物基因载体 | 第12-13页 |
| 1.2.3 阳离子聚合物载体介导基因转染的一般过程 | 第13-14页 |
| 1.3 聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI) | 第14-17页 |
| 1.3.1 高分子量PEI的修饰与改性 | 第15-16页 |
| 1.3.2 低分子量PEI的修饰与改性 | 第16-17页 |
| 1.4 含原酸酯的阳离子聚合物基因载体 | 第17页 |
| 1.5 选题思路及研究内容 | 第17-20页 |
| 第二章 基于原酸酯交联的低分子量PEI基因载体(POEI) | 第20-37页 |
| 2.1 引言 | 第20-21页 |
| 2.2 实验试剂和仪器 | 第21-23页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-25页 |
| 2.3.1 丙烯酸类原酸酯单体(OEAc)的合成 | 第23-25页 |
| 2.3.2 聚合物POEI的合成 | 第25页 |
| 2.4 合成产物的表征 | 第25-28页 |
| 2.4.1 结构表征 | 第25-26页 |
| 2.4.2 POEI的伯胺含量测定 | 第26页 |
| 2.4.3 POEI质子缓冲能力的测定 | 第26页 |
| 2.4.4 POEI的酸敏感性检测 | 第26-28页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第28-35页 |
| 2.5.1 二羟基原酸酯单体(OEDg)的核磁共振谱图分析 | 第28-29页 |
| 2.5.2 丙烯酸类原酸酯单体(OEAc)的核磁共振谱图分析 | 第29-30页 |
| 2.5.3 聚合物POEI的表征 | 第30-35页 |
| 2.6 本章小结 | 第35-37页 |
| 第三章 POEI/DNA复合物的制备及表征 | 第37-51页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验试剂和仪器 | 第37-39页 |
| 3.2.1 菌种与报告基因 | 第37页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-43页 |
| 3.3.1 菌种培养与无内毒素质粒提取 | 第39-40页 |
| 3.3.2 pEGFP-N1质粒的纯度及浓度测定 | 第40-41页 |
| 3.3.3 聚合物POEI/DNA复合物的制备 | 第41页 |
| 3.3.4 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验 | 第41-42页 |
| 3.3.5 肝素置换实验 | 第42页 |
| 3.3.6 DNase Ⅰ酶降解实验 | 第42页 |
| 3.3.7 POEI/DNA复合物的粒径以及Zeta电位测定 | 第42-43页 |
| 3.3.8 POEI/DNA复合物酸敏感性分析 | 第43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-50页 |
| 3.4.1 凝胶电泳阻滞实验 | 第43-45页 |
| 3.4.2 肝素置换实验 | 第45页 |
| 3.4.3 DNase Ⅰ酶降解实验 | 第45-47页 |
| 3.4.4 POEI/DNA复合物的粒径与Zeta电位 | 第47-48页 |
| 3.4.5 POEI/DNA复合物的酸敏感性实验 | 第48-50页 |
| 3.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第四章 POEI的细胞毒性评价及其介导的体外基因转染研究 | 第51-62页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验试剂和仪器 | 第51-53页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第51-52页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第52-53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-56页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第53-54页 |
| 4.3.2 细胞毒性实验 | 第54-55页 |
| 4.3.3 聚合物介导DNA的体外转染实验 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第56-61页 |
| 4.4.1 POEI的细胞毒性 | 第56-57页 |
| 4.4.2 POEI介导的体外基因转染 | 第57-61页 |
| 4.5 本章小结 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第72页 |
