| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 水产品过敏研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.1 水产品过敏研究现状 | 第11页 |
| 1.1.2 水产品致敏机制 | 第11页 |
| 1.1.3 水产品主要过敏原 | 第11-12页 |
| 1.1.3.1 甲壳类过敏原 | 第11-12页 |
| 1.1.3.2 鱼类过敏原 | 第12页 |
| 1.1.4 过敏原检测技术 | 第12-13页 |
| 1.1.4.1 ELISA法 | 第12-13页 |
| 1.1.4.2 PCR分析 | 第13页 |
| 1.1.4.3 过敏原指纹图谱检测技术 | 第13页 |
| 1.2 毛细管电泳研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 毛细管电泳概述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 毛细管电泳分离模式 | 第14页 |
| 1.2.3 毛细管电泳优势 | 第14-15页 |
| 1.2.4 毛细管电泳的应用 | 第15页 |
| 1.3 过敏原消减方法 | 第15-17页 |
| 1.3.1 物理法 | 第15-16页 |
| 1.3.2 化学法 | 第16-17页 |
| 1.3.3 生物法 | 第17页 |
| 1.4 过敏原表位研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.1 过敏原表位概述 | 第17-18页 |
| 1.4.2 过敏原表位定位技术 | 第18-19页 |
| 1.5 主要研究内容及意义 | 第19-21页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第19页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第19-20页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第20-21页 |
| 第2章 动态涂层毛细管电泳同时测定甲壳类水产品主要过敏原——TM和AK的含量 | 第21-41页 |
| 2.1 前言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.2 材料与试剂 | 第22-24页 |
| 2.2.2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.2.2.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.2.2.3 溶液的配制 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.3.1 样品前处理 | 第24-25页 |
| 2.3.2 蛋白含量测定 | 第25页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE电泳 | 第25-26页 |
| 2.3.4 离子交换层析纯化原肌球蛋白和精氨酸激酶 | 第26-27页 |
| 2.3.5 毛细管电泳条件 | 第27页 |
| 2.4 结果与分析 | 第27-39页 |
| 2.4.1 样品前处理 | 第27-30页 |
| 2.4.1.1 虾蛋白浸液的蛋白含量测定及SDS-PAGE分析 | 第27-29页 |
| 2.4.1.2 离子交换层析纯化原肌球蛋白和精氨酸激酶 | 第29-30页 |
| 2.4.2 毛细管电泳条件的选择与优化 | 第30-35页 |
| 2.4.2.1 运行缓冲液的选择 | 第30页 |
| 2.4.2.2 分离电压的优化 | 第30-31页 |
| 2.4.2.3 运行缓冲液离子浓度的优化 | 第31-32页 |
| 2.4.2.4 运行缓冲液pH的优化 | 第32页 |
| 2.4.2.5 动态涂层材料的优化 | 第32-35页 |
| 2.4.3 方法学考察 | 第35-38页 |
| 2.4.3.1 标准曲线、线性范围、检测限及定量限 | 第35-36页 |
| 2.4.3.2 方法的精密度和重现性 | 第36-38页 |
| 2.4.4 甲壳类原肌球蛋白和精氨酸激酶的含量 | 第38-39页 |
| 2.5 讨论 | 第39页 |
| 2.6 小结 | 第39-41页 |
| 第3章 超高压和蛋白酶对虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白抗原性消减的研究 | 第41-55页 |
| 3.1 前言 | 第41-42页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第42-43页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第42页 |
| 3.2.2 材料与试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.2.1 材料 | 第42-43页 |
| 3.2.2.2 主要试剂 | 第43页 |
| 3.2.2.3 溶液的配制 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-46页 |
| 3.3.1 Ⅰ型胶原蛋白的提取与纯化 | 第43-44页 |
| 3.3.2 SDS-PAGE | 第44-45页 |
| 3.3.3 前处理 | 第45页 |
| 3.3.3.1 超高压处理 | 第45页 |
| 3.3.3.2 酶处理 | 第45页 |
| 3.3.4 间接ELISA | 第45-46页 |
| 3.3.5 数据处理 | 第46页 |
| 3.4 结果与分析 | 第46-53页 |
| 3.4.1 1型胶原蛋白的提取与纯化 | 第46-47页 |
| 3.4.2 酶解对虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白SDS-PAGE结果的影响 | 第47-49页 |
| 3.4.2.1 E:S对α-糜蛋白酶酶解Ⅰ型胶原蛋白SDS-PAGE结果的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.2.2 E:S对木瓜蛋白酶酶Ⅰ型胶原蛋白SDS-PAGE结果的影响 | 第48页 |
| 3.4.2.3 E:S对胰蛋白酶酶解Ⅰ型胶原蛋白SDS-PAGE结果的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.3 超高压对虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白ELISA结果的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.4 酶解对虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白ELISA结果的影响 | 第50-53页 |
| 3.4.4.1 E:S对α-糜蛋白酶酶解Ⅰ型胶原蛋白ELISA结果的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.4.2 E:S对木瓜蛋白酶酶酶解Ⅰ型胶原蛋白ELISA结果的影响 | 第51-52页 |
| 3.4.4.3 E:S对胰蛋白酶酶酶解Ⅰ型胶原蛋白ELISA结果的影响 | 第52-53页 |
| 3.5 讨论 | 第53-54页 |
| 3.6 小结 | 第54-55页 |
| 第4章 虹鳟鱼过敏原——Ⅰ型胶原蛋白线性表位的鉴定 | 第55-74页 |
| 4.1 前言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第55-56页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第55-56页 |
| 4.2.2 材料与试剂 | 第56页 |
| 4.2.2.1 材料 | 第56页 |
| 4.2.2.2 主要试剂 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-60页 |
| 4.3.1 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的线性表位预测 | 第56-58页 |
| 4.3.1.1 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α1和α2亚基的亲水性分析 | 第57页 |
| 4.3.1.2 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α1和α2亚基的可塑性分析 | 第57页 |
| 4.3.1.3 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α1和α2亚基的可及性分析 | 第57页 |
| 4.3.1.4 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α1和α2亚基的抗原指数分析 | 第57页 |
| 4.3.1.5 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α1和α2亚基的二级结构分析 | 第57页 |
| 4.3.1.6 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α1和α2亚基线性表位的在线工具预测 | 第57页 |
| 4.3.1.7 虹鳟鱼与其他鱼类的Ⅰ型胶原蛋白的α1和α2亚基的同源性分析 | 第57-58页 |
| 4.3.2 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α1和α2亚基预测表位多肽的合成 | 第58页 |
| 4.3.3 构建细胞模型验证合成表位 | 第58-60页 |
| 4.3.3.1 LAD2细胞培养及活化 | 第58-59页 |
| 4.3.3.2 组胺检测 | 第59页 |
| 4.3.3.3 类胰蛋白酶检测 | 第59-60页 |
| 4.3.4 数据处理 | 第60页 |
| 4.4 结果与分析 | 第60-72页 |
| 4.4.1 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α1亚基的线性表位预测 | 第60-65页 |
| 4.4.1.1 α1亚基的亲疏水性分析 | 第60页 |
| 4.4.1.2 α1亚基的可塑性分析 | 第60-61页 |
| 4.4.1.3 α1亚基的可及性分析 | 第61页 |
| 4.4.1.4 α1亚基的抗原指数分析 | 第61-62页 |
| 4.4.1.5 α1亚基的二级结构分析 | 第62-63页 |
| 4.4.1.6 虹鳟鱼与其他鱼类的Ⅰ型胶原蛋白的α1亚基的同源性分析 | 第63页 |
| 4.4.1.7 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α1亚基的线性表位的在线工具预测 | 第63-64页 |
| 4.4.1.8 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α1亚基的线性表位的综合分析预测 | 第64-65页 |
| 4.4.2 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α2亚基的线性表位预测 | 第65-70页 |
| 4.4.2.1 α2亚基的亲疏水性分析 | 第65-66页 |
| 4.4.2.2 α2亚基的可塑性分析 | 第66页 |
| 4.4.2.3 α2亚基的可及性分析 | 第66页 |
| 4.4.2.4 α2亚基的抗原指数分析 | 第66-67页 |
| 4.4.2.5 α2亚基的二级结构分析 | 第67-68页 |
| 4.4.2.6 虹鳟鱼与其他鱼类的Ⅰ型胶原蛋白的α2亚基的同源性分析 | 第68-69页 |
| 4.4.2.7 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α2亚基的线性表位的在线工具预测 | 第69页 |
| 4.4.2.8 虹鳟鱼Ⅰ型胶原蛋白的α2亚基的线性表位的综合分析预测 | 第69-70页 |
| 4.4.3 合成多肽的纯度及准确性分析 | 第70-71页 |
| 4.4.4 合成表位的验证 | 第71-72页 |
| 4.5 讨论 | 第72-73页 |
| 4.6 小结 | 第73-74页 |
| 第5章 结论与展望 | 第74-76页 |
| 5.1 结论 | 第74页 |
| 5.2 创新性 | 第74页 |
| 5.3 展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录 | 第82-90页 |
| 硕士期间发表论文 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
