| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 4-羟基异亮氨酸简介 | 第9页 |
| 1.2 4-HIL的理化性质 | 第9页 |
| 1.3 4-HIL的主要功能 | 第9-11页 |
| 1.3.1 促胰岛素分泌，增强葡萄糖耐受性 | 第10页 |
| 1.3.2 改善组织或器官对于胰岛素的抵抗性 | 第10页 |
| 1.3.3 调节血脂异常，促进脂肪代谢 | 第10-11页 |
| 1.4 4-HIL的生产方法 | 第11-12页 |
| 1.4.1 葫芦巴种子分离提取法 | 第11页 |
| 1.4.2 化学-酶合成法 | 第11页 |
| 1.4.3 微生物转化法 | 第11-12页 |
| 1.4.4 微生物从头合成法 | 第12页 |
| 1.5 重组谷氨酸棒杆菌中 4-HIL合成途径及相关节点 | 第12-15页 |
| 1.5.1 谷氨酸棒杆菌中 4-HIL合成途径简介 | 第12-13页 |
| 1.5.2 L-异亮氨酸的合成 | 第13-14页 |
| 1.5.3 α-酮戊二酸合成和代谢 | 第14页 |
| 1.5.4 草酰乙酸的回补 | 第14-15页 |
| 1.5.5 氧气的供应 | 第15页 |
| 1.6 立题背景与意义 | 第15-16页 |
| 1.7 本论文主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第17-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第17-18页 |
| 2.1.2 实验主要引物 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.5 主要培养基和菌株的培养条件 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 分子实验操作 | 第21-22页 |
| 2.2.2 表达质粒和菌株的构建 | 第22-25页 |
| 2.2.3 重组菌株的摇瓶发酵 | 第25页 |
| 2.2.4 发酵结果分析 | 第25-26页 |
| 2.2.5 基因转录水平分析 | 第26页 |
| 2.2.6 谷氨酸棒杆菌中IDO酶活的测定 | 第26页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE分析 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-44页 |
| 3.1 过表达ilvA对重组谷氨酸棒杆菌 4-HIL发酵的影响 | 第27-29页 |
| 3.1.1 构建质粒pSZ02 | 第27页 |
| 3.1.2 过表达ilvA对菌株生长状况的影响 | 第27-28页 |
| 3.1.3 过表达ilvA对菌株发酵氨基酸产量的影响 | 第28-29页 |
| 3.1.4 过表达ilvA的菌株中 α-KG含量的测定 | 第29页 |
| 3.2 过表达lgox和cat对重组谷氨酸棒杆菌 4-HIL发酵的影响 | 第29-33页 |
| 3.2.1 构建质粒pSZ03和pSZ04 | 第30-31页 |
| 3.2.2 过表达lgox和cat对菌株生长状况的影响 | 第31页 |
| 3.2.3 过表达lgox和cat对菌株发酵氨基酸产量的影响 | 第31-33页 |
| 3.3 过表达mqo对重组谷氨酸棒杆菌 4-HIL发酵的影响 | 第33-37页 |
| 3.3.1 构建质粒pSZ05 | 第33页 |
| 3.3.2 过表达mqo对菌株生长状况的影响 | 第33-34页 |
| 3.3.3 过表达mqo对菌株发酵氨基酸产量的影响 | 第34-35页 |
| 3.3.4 过表达mqo后关键基因转录水平的变化 | 第35-36页 |
| 3.3.5 过表达mqo后 α-KG含量和胞内氨基酸含量的变化 | 第36页 |
| 3.3.6 添加 α-KG对 4-HIL产量的影响 | 第36-37页 |
| 3.4 过表达vgb对重组谷氨酸棒杆菌 4-HIL发酵的影响 | 第37-40页 |
| 3.4.1 构建质粒pSZ06 | 第37-38页 |
| 3.4.2 过表达vgb对菌株生长状况的影响 | 第38页 |
| 3.4.3 过表达vgb对菌株发酵氨基酸产量的影响 | 第38-39页 |
| 3.4.4 过表达vgb后IDO表达及酶活变化 | 第39-40页 |
| 3.5 共表达vgb和mqo或ilvA对重组谷氨酸棒杆菌 4-HIL发酵的影响 | 第40-44页 |
| 3.5.1 构建质粒pSN07和p SN08 | 第40-41页 |
| 3.5.2 共表达vgb和mqo或ilvA对菌株生长状况的影响 | 第41-42页 |
| 3.5.3 共表达vgb和mqo或ilvA对菌株发酵氨基酸产量的影响 | 第42-43页 |
| 3.5.4 共表达vgb和mqo或ilvA的菌株中 α-KG含量的变化 | 第43-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-46页 |
| 主要结论 | 第44-45页 |
| 展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52页 |
