| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第10-26页 |
| 1.1 生物燃料和脂肪烃类生物燃料概述 | 第10-12页 |
| 1.2 基于异丙醇和丁醇代谢改造的生物燃料合成途径 | 第12-14页 |
| 1.3 基于脂肪酸代谢改造的脂肪烃生物合成途径 | 第14-16页 |
| 1.4 基于大肠杆菌脂肪酸代谢的脂肪烃合成途径 | 第16-17页 |
| 1.5 脂肪酶TlL和细胞色素P450酶 | 第17-18页 |
| 1.6 融合蛋白概述 | 第18-22页 |
| 1.7 融合蛋白在毕赤酵母系统中的表达 | 第22-24页 |
| 1.8 课题的内容、设计思路及意义 | 第24-26页 |
| 1.8.1 课题的研究内容 | 第24页 |
| 1.8.2 课题的设计思路 | 第24-25页 |
| 1.8.3 研究意义 | 第25-26页 |
| 第二章 融合蛋白的表达、纯化以及酶活分析 | 第26-62页 |
| 2.1 引言 | 第26-27页 |
| 2.2 方案与技术路线 | 第27-28页 |
| 2.3 实验材料 | 第28-36页 |
| 2.3.1 目的基因和引物 | 第28-31页 |
| 2.3.2 化学试剂、工具酶及分子量maker、试剂盒、仪器和设备 | 第31-33页 |
| 2.3.3 相关溶液和培养基 | 第33-36页 |
| 2.4 实验方法 | 第36-46页 |
| 2.4.1 质粒提取 | 第36页 |
| 2.4.2 目的片段扩增 | 第36-38页 |
| 2.4.3 大肠杆菌化学感受态细胞的制备 | 第38页 |
| 2.4.4 大肠杆菌化学感受态细胞的DNA转化 | 第38-39页 |
| 2.4.5 表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.4.6 重组蛋白诱导表达和Ni柱纯化 | 第40-41页 |
| 2.4.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第41页 |
| 2.4.8 蛋白浓度测定 | 第41-42页 |
| 2.4.9 甘油三脂、脂肪酸和烯烃样品的配制 | 第42-43页 |
| 2.4.10 融合表达对TlL与OleTJE结构及活性的影响 | 第43-45页 |
| 2.4.11 重组蛋白的酶学特性测定 | 第45-46页 |
| 2.4.12 GC检测分析条件 | 第46页 |
| 2.5 结果与分析 | 第46-60页 |
| 2.5.1 菌株和质粒 | 第46-48页 |
| 2.5.2 表达质粒的构建及鉴定 | 第48-49页 |
| 2.5.3 重组融合蛋白的表达纯化 | 第49-52页 |
| 2.5.4 融合表达对TlL与OleTJE结构及活性的影响 | 第52-54页 |
| 2.5.5 融合蛋白脱羧活性研究 | 第54-56页 |
| 2.5.6 最佳活性融合蛋白体外产烃研究 | 第56-57页 |
| 2.5.7 最佳活性融合蛋白底物特异性研究 | 第57-60页 |
| 2.6 本章小结 | 第60-62页 |
| 第三章 融合蛋白在毕赤酵母中的研究 | 第62-85页 |
| 3.1 引言 | 第62-63页 |
| 3.2 方案与技术路线 | 第63-64页 |
| 3.3 实验材料 | 第64-72页 |
| 3.3.1 目的基因和引物 | 第64-66页 |
| 3.3.2 化学试剂、工具酶及分子量maker、试剂盒、仪器和设备 | 第66-69页 |
| 3.3.3 相关溶液和培养基 | 第69-72页 |
| 3.4 实验方法 | 第72-80页 |
| 3.4.1 目的片段扩增 | 第72-73页 |
| 3.4.2 pPICZαA-TlL-OleT_(JE)的构建 | 第73-74页 |
| 3.4.3 重组DNA的大量提取 | 第74-75页 |
| 3.4.4 毕赤酵母电转化感受态细胞制备 | 第75-76页 |
| 3.4.5 毕赤酵母电转化重组DNA | 第76-77页 |
| 3.4.6 毕赤酵母重组子的验证 | 第77-78页 |
| 3.4.7 重组蛋白的表达和纯化 | 第78-80页 |
| 3.5 结果与分析 | 第80-83页 |
| 3.5.1 菌株和质粒 | 第80页 |
| 3.5.2 表达质粒的构建及鉴定 | 第80-82页 |
| 3.5.3 重组融合蛋白的表达纯化 | 第82-83页 |
| 3.6 本章小结 | 第83-85页 |
| 第四章 讨论 | 第85-87页 |
| 结论 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-97页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第97-98页 |
