| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第9-15页 |
| 1.1 梨果皮褐色研究进展 | 第9-10页 |
| 1.2 多胺研究进展 | 第10-13页 |
| 1.2.1 多胺的生物合成与降解代谢途径 | 第10-12页 |
| 1.2.2 多胺合成过程中相关酶基因研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 转基因研究进展 | 第13-15页 |
| 2 引言 | 第15-17页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第15页 |
| 2.2 研究的内容 | 第15-16页 |
| 2.3 技术路线 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-31页 |
| 3.1 试验材料 | 第17页 |
| 3.2 试验仪器 | 第17页 |
| 3.3 主要试剂 | 第17-18页 |
| 3.3.1 RNA提取试剂 | 第17页 |
| 3.3.2 PCR反应体系及酶切所需试剂 | 第17-18页 |
| 3.3.3 琼脂糖电泳试剂 | 第18页 |
| 3.3.4 菌株及载体 | 第18页 |
| 3.4 试验方法 | 第18-31页 |
| 3.4.1 多胺含量的测定 | 第18-19页 |
| 3.4.2 梨皮中总RNA的提取以及质量检测 | 第19-20页 |
| 3.4.2.1 总RNA的提取 | 第19-20页 |
| 3.4.2.2 总RNA的检测 | 第20页 |
| 3.4.3 总RNA反转录成cDNA与其浓度的测定 | 第20页 |
| 3.4.4 多胺合成相关基因的克隆与生物信息学分析 | 第20-23页 |
| 3.4.4.1 多胺合成相关基因的克隆 | 第20-23页 |
| 3.4.4.2 多胺合成相关基因生物信息学分析 | 第23页 |
| 3.4.5 多胺合成相关基因表达分析 | 第23-24页 |
| 3.4.6 梨多胺SPMS基因载体的构建 | 第24-28页 |
| 3.4.6.1 多胺SPMS基因全长的获得 | 第24页 |
| 3.4.6.2 SPMS基因加入酶切位点及保护碱基 | 第24-25页 |
| 3.4.6.3 DNA片段回收，连接与转化 | 第25页 |
| 3.4.6.4 SPMS基因菌液PCR检测 | 第25-26页 |
| 3.4.6.5 PGEM-T-SPMS测序鉴定 | 第26页 |
| 3.4.6.6 pBll21的活化 | 第26页 |
| 3.4.6.7 PGEM-T-SPMS及pBll21质粒的抽提 | 第26页 |
| 3.4.6.8 pBll21及PGEM-T-SPMS质粒的酶切 | 第26-27页 |
| 3.4.6.9 连接 | 第27页 |
| 3.4.6.10 pBll21-SPMS连接产物的转化大肠杆菌 | 第27-28页 |
| 3.4.6.11 pBll21-SPMS菌液检测与酶切验证 | 第28页 |
| 3.4.7 根癌农杆菌EHA105感受态细胞的制备与转化 | 第28-29页 |
| 3.4.7.1 YEB培养基与拟南芥营养液的配置 | 第28-29页 |
| 3.4.7.2 根癌农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 3.4.7.3 转化农杆菌 | 第29页 |
| 3.4.8 拟南芥的栽培及转化 | 第29-31页 |
| 3.4.8.1 拟南芥播种及管理 | 第29-30页 |
| 3.4.8.2 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第30-31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-46页 |
| 4.1 ‘砀山酥梨’与‘锈酥’果皮中三种多胺含量 | 第31-33页 |
| 4.2 总RNA的提取及cDNA检测 | 第33-34页 |
| 4.2.1 总RNA的检测 | 第33页 |
| 4.2.2 cDNA浓度的检测 | 第33-34页 |
| 4.3 多胺合成中相关基因的克隆与表达分析 | 第34-41页 |
| 4.3.1 多胺合成过程中相关酶基因克隆及生物信息学分析 | 第34-40页 |
| 4.3.2 多胺合成中相关基因的表达分析 | 第40-41页 |
| 4.4 SPMS基因表达载体构建 | 第41-46页 |
| 4.4.1 加入酶切位点后所获基因全长 | 第41-42页 |
| 4.4.2 PGEM-T-SPMS菌液检测及酶切验证 | 第42-43页 |
| 4.4.3 表达载体的制备 | 第43-44页 |
| 4.4.4 重组子pBll21-SPMS菌液PCR检测 | 第44页 |
| 4.4.5 重组子pBll21-SPMS酶切验证 | 第44-45页 |
| 4.4.6 转化农杆菌EHA105 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-48页 |
| 5.1 木质素或木栓质与果皮褐色的关系 | 第46页 |
| 5.2 多胺与木质素或木栓质的关系 | 第46-48页 |
| 6 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
