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Caveolae介导肠外致病性大肠杆菌侵入脑微血管内皮细胞的机制研究

摘要第6-8页
Abstract第8-9页
缩略词表(Abbreviation)第10-11页
1.前言第11-18页
    1.1 研究问题的由来第11-12页
    1.2 文献综述第12-17页
        1.2.1 ExPEC的研究进展第12-13页
        1.2.2 细菌性脑膜炎的研究进展第13-14页
        1.2.3 caveolae的研究进展第14-17页
        1.2.4 胞吞介导的细菌入胞机制第17页
    1.3 研究目的和意义第17-18页
2. 材料与方法第18-32页
    2.1 材料第18-21页
        2.1.1 质粒、菌株和细胞第18页
        2.1.2 主要载体第18页
        2.1.3 试剂、药品和试剂盒第18-19页
        2.1.4 培养基与药物及其配制第19-20页
        2.1.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液第20页
        2.1.6 实验引物第20-21页
        2.1.7 主要仪器设备第21页
        2.1.8 实验动物第21页
    2.2 实验方法第21-32页
        2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备第21-22页
        2.2.2 质粒的小量提取第22页
        2.2.3 质粒的去内毒素大量提取第22-23页
        2.2.4 琼脂糖凝胶回收第23-24页
        2.2.5 DNA产物纯化第24页
        2.2.6 PCR扩増第24-25页
        2.2.7 DNA与载体酶切第25页
        2.2.8 DNA与载体连接第25页
        2.2.9 连接产物的转化(CaCl2法)第25-26页
        2.2.10 细菌的侵入实验第26-27页
        2.2.11 小鼠感染实验第27页
        2.2.12 HBMEC转染第27-29页
        2.2.13 细胞RNA提取第29页
        2.2.14 RNA反转录第29-30页
        2.2.15 荧光定量PCR第30-31页
        2.2.16 统计学分析第31-32页
3.结果与分析第32-42页
    3.1 HBMEC中caveolin的检测第32-34页
        3.1.1 HBMEC细胞中caveolin的基因检测第32页
        3.1.2 caveolin随感染时间的变化检测第32-34页
    3.2 caveolae在PCN033突破血脑屏障中的作用第34-37页
        3.2.1 MβCD和Filipin处理后对PCN033侵入HBMEC的影响第34-35页
        3.2.2 MβCD和Filipin给药对PCN033菌株侵入小鼠脑组织的影响第35-37页
    3.3 干扰和过表达CAV-1 对caveolae的影响第37-39页
        3.3.1 干扰HBMEC细胞中caveolin-1第37页
        3.3.2 过表达HBMEC细胞中caveolin-1第37-39页
    3.4 SREBP调节caveolin的主要形式第39-42页
        3.4.1 细菌与HBMEC的结合方式第39页
        3.4.2 SREBP在HBMEC中的作用形式第39-42页
4.讨论第42-45页
    4.1 caveolae存在于脑微血管内皮细胞(BMEC)表面第42页
    4.2 caveolae在血管功能中的作用第42-43页
    4.3 caveolin的调节信号传导分子机制第43-44页
    4.4 小结与展望第44-45页
5.结论第45-46页
参考文献第46-54页
致谢第54页

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