| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| ·乙烯以及替代物 | 第9-10页 |
| ·乙烯 | 第9页 |
| ·乙烯的替代物 | 第9-10页 |
| ·观赏凤梨 | 第10-11页 |
| ·开花 | 第11-18页 |
| ·自然开花 | 第11页 |
| ·激素诱导的花芽分化 | 第11-14页 |
| ·激素平衡控制花芽分化假说 | 第12页 |
| ·激素调控成花基因表达假说 | 第12-13页 |
| ·激素调控营养转向假说 | 第13页 |
| ·激素信号调节花芽分化假说 | 第13-14页 |
| ·凤梨科植物乙烯诱导开花 | 第14-16页 |
| ·乙烯催化开花的机理 | 第16-18页 |
| ·植物EIN3/EILs基因家族 | 第18-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-37页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-37页 |
| ·反向Northern点杂交 | 第21-24页 |
| ·cDNA的合成 | 第22-23页 |
| ·荧光标记cDNA探针的制备 | 第23页 |
| ·克隆斑点印迹膜的制备 | 第23-24页 |
| ·杂交 | 第24页 |
| ·杂交结果的检测 | 第24页 |
| ·RACE | 第24-29页 |
| ·总RNA的提取及mRNA纯化 | 第24页 |
| ·模板的合成 | 第24-25页 |
| ·mRNA3'和5'端片段的获得 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第26页 |
| ·连接转化 | 第26-27页 |
| ·阳性菌落的PCR鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组子质粒酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·测序 | 第29页 |
| ·cDNA全长的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增全长 | 第29-30页 |
| ·T/A克隆与测序 | 第30页 |
| ·染色体步移 | 第30-33页 |
| ·DNA的提取 | 第30页 |
| ·染色体步移(Genome Walking)获取启动子及调控元件 | 第30-33页 |
| ·T/A克隆与测序 | 第33页 |
| ·半定量RT-PCR | 第33-34页 |
| ·总RNA的提取 | 第33页 |
| ·反转录cDNA | 第33页 |
| ·PCR | 第33-34页 |
| ·Northern印记杂交 | 第34-35页 |
| ·探针的合成 | 第34-35页 |
| ·杂交膜的制备 | 第35页 |
| ·杂交 | 第35页 |
| ·杂交结果检测 | 第35页 |
| ·基因与蛋白的生物信息学分析 | 第35-37页 |
| ·核酸分析部分 | 第35页 |
| ·蛋白分析部分 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-63页 |
| ·片段获得、分析与初步验证 | 第37-38页 |
| ·片段获得与分析 | 第37页 |
| ·反向Northern斑点杂交 | 第37-38页 |
| ·RACE | 第38-40页 |
| ·引物设计 | 第38页 |
| ·总RNA的提取(CTAB法) | 第38-39页 |
| ·5,RACE和3,RACE | 第39-40页 |
| ·染色体步移 | 第40-42页 |
| ·半定量RT-PCR | 第42-45页 |
| ·目的片段的测序 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR电泳检测结果 | 第43-45页 |
| ·Northern印迹杂交 | 第45-46页 |
| ·生物信息学分析 | 第46-63页 |
| ·EIN3基因、核心启动子及上游调控元件 | 第46-48页 |
| ·核酸序列比对 | 第48-49页 |
| ·开放阅读框(ORF) | 第49页 |
| ·蛋白质序列比对 | 第49-52页 |
| ·BLAST-P序列比对 | 第49-50页 |
| ·与其他物种EIN3/EILs基因的氨基酸序列比对 | 第50-52页 |
| ·凤梨EIN3基因与其他植物EIN3/EILs基因之间的进化关系 | 第52-53页 |
| ·理化性质分析 | 第53-54页 |
| ·蛋白质疏水性分析 | 第54页 |
| ·分泌蛋白预测 | 第54-56页 |
| ·核定位蛋白 | 第56页 |
| ·亚细胞定位 | 第56-57页 |
| ·结构域与功能域分析 | 第57-59页 |
| ·三级结构预测 | 第59-61页 |
| ·EIN3基因及EIN3结构域的3D结构预测 | 第59页 |
| ·EIN3结构域分析 | 第59-61页 |
| ·功能预测 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-68页 |
| ·确定目的基因 | 第63页 |
| ·获得基因全长 | 第63页 |
| ·获得基因的核心启动子区以及调控元件 | 第63-64页 |
| ·基因表达分析 | 第64-65页 |
| ·生物信息学分析 | 第65页 |
| ·EIN3基因参与的生物过程 | 第65-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
