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姜黄素生物合成途径中关键酶基因的克隆、功能分析和遗传转化

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
第1章 前言第11-21页
    1.1 姜黄的主要化学成分及其药理作用第11-14页
        1.1.1 化学成分第11页
        1.1.2 药理作用第11-14页
            1.1.2.1 抗炎作用第11-12页
            1.1.2.2 抗肿瘤活性第12页
            1.1.2.3 抗氧化活性第12-13页
            1.1.2.4 对心血管系统的作用第13页
            1.1.2.5 抗肝、肾损伤和纤维化作用第13页
            1.1.2.6 代谢疾病中的作用第13-14页
    1.2 姜黄素生物合成途径研究进展第14-16页
    1.3 姜黄素生物合成途径中一些酶基因研究进展第16-19页
        1.3.1 苯丙氨酸解氨酶(PAL)第16页
        1.3.2 4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)第16-17页
        1.3.3 肉桂酸4羟化酶(C4H)第17-18页
            1.3.3.1 C4H基因组织表达特异性研究第17页
            1.3.3.2 基因胁迫条件下的表达模式研究第17-18页
        1.3.4 氧甲基转移酶(咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶CCOMT和咖啡酸氧甲基转移酶COMT)第18页
        1.3.5 二酮辅酶A合成酶(DCS)第18页
        1.3.6 姜黄素合成酶(Curcumin synthase, CURS)第18-19页
    1.4 本实验的研究目的和技术路线第19-21页
第2章 姜黄DCS基因的克隆与功能分析第21-44页
    2.1 实验材料与设计第21-23页
        2.1.1 植物材料第21页
        2.1.2 实验设计第21-22页
        2.1.3 实验药品和仪器第22-23页
    2.2 实验方法第23-29页
        2.2.1 RNA的提取第23-24页
        2.2.2 姜黄RNA的纯化第24页
        2.2.3 cDNA第一链的合成第24页
        2.2.4 DCS基因保守区片段的扩增和检测第24-26页
        2.2.5 DCS基因CDS片段回收第26页
        2.2.6 DCS基因CDS片段重组入质粒载体第26页
        2.2.7 阳性克隆的筛选第26-27页
        2.2.8 基因序列测定及结果分析第27页
        2.2.9 DCS基因的生物信息学分析第27-28页
        2.2.10 DCS基因不同组织部位表达模式分析第28-29页
        2.2.11 DCS基因在NaCl胁迫、SNP作用下表达模式分析第29页
    2.3 结果与分析第29-43页
        2.3.1 DCS基因的CDS区的获得第29-31页
        2.3.2 姜黄DCS基因CDS区的生物信息学分析第31-36页
            2.3.2.1 DCS蛋白的结构特征第31页
            2.3.2.2 DCS蛋白的理化性质第31-34页
            2.3.2.3 DCS蛋白的结构预测第34-36页
        2.3.3 DCS基因表达模式分析第36-43页
            2.3.3.1 姜黄DCS基因不同组织部位表达模式第36-39页
            2.3.3.2 NaCl胁迫下DCS基因表达模式分析第39-41页
            2.3.3.3 SNP作用下DCS基因表达模式分析第41-43页
    2.4 讨论第43-44页
第3章 姜黄C4H基因的克隆与功能分析第44-64页
    3.1 实验材料与设计第44-45页
        3.1.1 植物材料第44页
        3.1.2 实验设计第44页
        3.1.3 实验药品和仪器第44-45页
    3.2 方法第45-51页
        3.2.1 RNA的提取第45页
        3.2.2 姜黄RNA的纯化第45页
        3.2.3 cDNA第一链的合成第45页
        3.2.4 C4H基因保守区片序列的获得第45-46页
        3.2.5 C4H基因 3’端获得第46-48页
        3.2.6 C4H基因 5’端获得第48-50页
        3.2.7 C4H基因不同组织部位表达模式分析第50页
        3.2.8 C4H基因在NaCl胁迫、SNP作用下的表达模式分析第50-51页
    3.3 结果与分析第51-62页
        3.3.1 姜黄C4H保守区片段的克隆第51-53页
            3.3.1.2 姜黄C4H基因 3’端的克隆第51-52页
            3.3.1.3 姜黄C4H基因 5’端的克隆第52-53页
        3.3.2 姜黄C4H基因的生物信息学分析第53-59页
            3.3.2.1 C4H蛋白的结构特征第53-54页
            3.3.2.2 C4H蛋白的理化性质第54-56页
            3.3.2.3 C4H蛋白质结构的预测第56-57页
            3.3.2.4 C4H蛋白进化树分析第57-59页
        3.3.3 姜黄C4H基因表达模式分析第59-62页
            3.3.3.1 不同组织部位C4H基因表达模式第59-60页
            3.3.3.2 姜黄C4H基因在NaCl胁迫下的表达模式分析第60-61页
            3.3.3.3 姜黄C4H基因在SNP作用下的表达模式分析第61-62页
    3.4 讨论第62-64页
        3.4.1 姜黄C4H基因的克隆与生物信息学分析第62页
        3.4.2 姜黄C4H基因表达模式分析第62-64页
第4章 姜黄CURS基因的遗传转化第64-69页
    4.1 实验材料第64-65页
        4.1.1 植物材料第64页
        4.1.2 实验药品和仪器第64-65页
    4.2 实验方法第65-67页
        4.2.1 农杆菌的活化第65页
        4.2.2 农杆菌介导CURS转化烟草第65-66页
        4.2.3 转基因烟草的RT-PCR检测第66-67页
            4.2.3.1 烟草组培苗总RNA的提取第66页
            4.2.3.2 总RNA的纯化第66页
            4.2.3.3 烟草cDNA第一条链的合成第66页
            4.2.3.4 PCR扩增第66-67页
    4.3 结果与分析第67-68页
        4.3.1 转CURS基因烟草抗性植株第67-68页
        4.3.2 转CURS基因烟草抗性植株RT-PCR分析第68页
    4.4 讨论第68-69页
第5章 结论与展望第69-72页
    5.1 主要的研究结论第69-70页
    5.2 展望第70-72页
参考文献第72-76页
致谢第76-77页
个人简历、在校期间发表的学术论文和研究成果第77页

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