| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩写词 | 第18-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-42页 |
| 1 稻瘟病及稻瘟病菌概述 | 第20-23页 |
| 2 稻瘟病菌致病分子机理研究 | 第23-37页 |
| 2.1 稻瘟病菌信号途径研究进展 | 第23-31页 |
| 2.1.1 cAMP-PKA信号途径调控早期表面信号识别和附着胞分化 | 第23-26页 |
| 2.1.2 稻瘟病菌MAPK信号途径研究 | 第26-31页 |
| 2.1.2.1 Pmk1 MAPK信号途径调控后期附着胞的形成及穿透 | 第27-29页 |
| 2.1.2.2 Mps1 MAPK信号途径调控细胞壁完整性以及附着胞穿透 | 第29-30页 |
| 2.1.2.3 Osm1 MAPK信号途径参与细胞渗透调节 | 第30-31页 |
| 2.2 稻瘟病菌分生孢子产生机制研究 | 第31-33页 |
| 2.3 细胞周期调控的稻瘟病菌附着胞形成及侵染研究 | 第33-35页 |
| 2.4 稻瘟病菌转录因子研究进展 | 第35-37页 |
| 3 Cks1蛋白(Cyclin-dependent kinase subunit)研究概况 | 第37-42页 |
| 3.1 Cks1蛋白功能研究概况 | 第38-40页 |
| 3.2 Cks1蛋白结构特点 | 第40-42页 |
| 第二章 材料与方法 | 第42-70页 |
| 1 试验材料 | 第42-47页 |
| 1.1 供试菌株 | 第42页 |
| 1.2 供试质粒载体 | 第42页 |
| 1.3 供试植物 | 第42页 |
| 1.4 供试分子生物学试剂 | 第42-43页 |
| 1.5 供试抗生素 | 第43页 |
| 1.6 供试培养基及配方 | 第43-47页 |
| 2 试验方法 | 第47-70页 |
| 2.1 常规分子生物学实验操作 | 第47-56页 |
| 2.1.1 PCR技术 | 第47-50页 |
| 2.1.2 DNA操作 | 第50-55页 |
| 2.1.2.1 大肠杆菌质粒DNA提取 | 第50-51页 |
| 2.1.2.2 稻瘟病菌基因组DNA小量快速提取 | 第51页 |
| 2.1.2.3 稻瘟病菌基因组DNA大量提取(CTAB法) | 第51-52页 |
| 2.1.2.4 DNA电泳 | 第52页 |
| 2.1.2.5 DNA凝胶回收 | 第52-53页 |
| 2.1.2.6 DNA酶切 | 第53页 |
| 2.1.2.7 质粒DNA酶切片段去磷酸化(SAP) | 第53-54页 |
| 2.1.2.8 DNA连接反应 | 第54页 |
| 2.1.2.9 质粒DNA大肠杆菌感受态细胞转化 | 第54-55页 |
| 2.1.3 RNA操作 | 第55-56页 |
| 2.1.3.1 稻瘟病菌总RNA提取 | 第55页 |
| 2.1.3.2 cDNA的合成 | 第55-56页 |
| 2.2 稻瘟病菌基因敲除载体构建 | 第56-57页 |
| 2.3 稻瘟病菌基因互补载体构建 | 第57-58页 |
| 2.4 稻瘟病菌原生质体的制备与转化 | 第58-59页 |
| 2.5 农杆菌介导的稻瘟病菌T-DNA转化 | 第59-60页 |
| 2.6 稻瘟病菌敲除转化子的验证 | 第60-65页 |
| 2.6.1 PCR和RT-PCR初步验证 | 第60页 |
| 2.6.2 稻瘟病菌基因组Southern杂交分析 | 第60-65页 |
| 2.6.2.1 稻瘟病菌基因组DNA的酶切消化、电泳及变性 | 第60-61页 |
| 2.6.2.2 DNA转膜 | 第61-62页 |
| 2.6.2.3 DIG标记DNA探针及杂交液的准备 | 第62页 |
| 2.6.2.4 Southern杂交过程 | 第62-63页 |
| 2.6.2.5 印记膜的洗涤 | 第63页 |
| 2.6.2.6 免疫显色 | 第63-65页 |
| 2.7 酵母双杂交试验 | 第65-66页 |
| 2.8 稻瘟病菌表型测定 | 第66-70页 |
| 2.8.1 稻瘟病菌菌落形态观察及生长速率测定 | 第66页 |
| 2.8.2 稻瘟病菌分生孢子诱导及侧拍 | 第66页 |
| 2.8.3 稻瘟病菌分生孢子形态观察和产孢量测定 | 第66页 |
| 2.8.4 稻瘟病菌附着胞形成观察 | 第66-67页 |
| 2.8.5 稻瘟病菌附着胞膨压测定 | 第67页 |
| 2.8.6 稻瘟病菌洋葱表皮穿透 | 第67页 |
| 2.8.7 稻瘟病菌大麦表皮穿透 | 第67页 |
| 2.8.8 稻瘟病菌致病性测定 | 第67-68页 |
| 2.8.8.1 大麦和水稻离体叶片接种 | 第67-68页 |
| 2.8.8.2 大麦和水稻喷雾接种 | 第68页 |
| 2.8.8.3 水稻幼根致病性测定 | 第68页 |
| 2.8.9 稻瘟病菌有性生殖测定 | 第68页 |
| 2.8.10 稻瘟病菌抗胁迫压力测定 | 第68-69页 |
| 2.8.11 稻瘟病菌染色实验 | 第69-70页 |
| 2.8.11.1 尼罗红（NileRed）染色观察脂滴转运 | 第69页 |
| 2.8.11.2 KI/I2染色观察脂滴转运 | 第69页 |
| 2.8.11.3 DAPI染色与观察细胞核 | 第69-70页 |
| 第三章 稻瘟病菌ZNF1的鉴定和功能分析 | 第70-102页 |
| 1. 结果分析 | 第70-100页 |
| 1.1 T-DNA插入突变体库的建立及致病缺陷突变体的获得 | 第70页 |
| 1.2 致病缺陷突变体中T-DNA插入位置及标记基因的鉴定 | 第70-72页 |
| 1.3 XF696中T-DNA标记基因ZNF1两种剪切体的鉴定和功能比较 | 第72-75页 |
| 1.3.1 ZNF1转录后有两种剪切形式 | 第72-73页 |
| 1.3.2 SⅠ和SⅡ都具有转录活性 | 第73-74页 |
| 1.3.3 SⅠ和SⅡ功能比较 | 第74-75页 |
| 1.4 ZNF1敲除突变体△znf1的获得 | 第75-76页 |
| 1.5 △znf1互补转化子的获得 | 第76-77页 |
| 1.6 ZNF1基因功能分析 | 第77-97页 |
| 1.6.1 △znf1丧失对寄主的致病性 | 第77-78页 |
| 1.6.2 △znf1产孢能力显著增加 | 第78-81页 |
| 1.6.3 ZNF1参与稻瘟病菌附着胞形成 | 第81-82页 |
| 1.6.4 △znf1不能穿透寄主表皮 | 第82-83页 |
| 1.6.5 △znf1能够响应外源cAMP和IBMX的诱导 | 第83-84页 |
| 1.6.6 ZNF在附着胞发育阶段表达显著上调 | 第84-87页 |
| 1.6.7 ZNF1在附着胞形成阶段的表达受Pmk1调控 | 第87-89页 |
| 1.6.8 ZNF1影响附着胞发育过程中有丝分裂进程及分生孢子细胞核的降解 | 第89-90页 |
| 1.6.9 △znf1分生孢子细胞自噬性降解过程受阻 | 第90-92页 |
| 1.6.10 ZNF1参与糖原和脂肪代谢 | 第92-95页 |
| 1.6.11 Znf1结构域功能分析 | 第95-97页 |
| 1.7 Znf1亚细胞定位分析 | 第97-100页 |
| 2 本章小结 | 第100-102页 |
| 第四章 稻瘟病菌CKS1的鉴定和功能分析 | 第102-132页 |
| 1 结果分析 | 第102-129页 |
| 1.1 与Som1相关基因的敲除 | 第102-103页 |
| 1.2 稻瘟病菌中Cks1与Soml互作 | 第103-105页 |
| 1.2.1 稻瘟病菌中Cks1的鉴定 | 第103-104页 |
| 1.2.2 稻瘟病菌中Cks1与Soml互作分析 | 第104-105页 |
| 1.3 稻瘟病菌中CKS1基因敲除 | 第105-106页 |
| 1.3.1 稻瘟病菌CKS1基因敲除载体的构建 | 第105页 |
| 1.3.2 稻瘟病菌CKS1基因敲除突变体的获得 | 第105-106页 |
| 1.4 稻瘟病菌中CKS1功能分析 | 第106-117页 |
| 1.4.1 CKS1影响稻瘟病菌的营养生长和菌落色素沉积 | 第106-109页 |
| 1.4.2 CKS1影响稻瘟病菌无性孢子的产生 | 第109-110页 |
| 1.4.3 CKS1影响稻瘟病菌致病性 | 第110-111页 |
| 1.4.4 CKS1影响稻瘟病菌穿透和侵染生长 | 第111-113页 |
| 1.4.5 CKS1影响稻瘟病菌菌落疏水性 | 第113-115页 |
| 1.4.6 CKS1参与维持稻瘟病菌细胞壁完整性 | 第115-117页 |
| 1.4.6.1 △cks1菌落自溶现象观察 | 第115-116页 |
| 1.4.6.2 △cks1对SDS和刚果红(Congred)敏感性降低 | 第116-117页 |
| 1.5 △cks1的互补及表型分析 | 第117-118页 |
| 1.5.1 稻瘟病菌CKS1基因互补△cks1转化子的获得 | 第117页 |
| 1.5.2 小麦赤霉病菌CKS1基因异源互补△cks1转化子的获得 | 第117页 |
| 1.5.3 互补转化子表型分析 | 第117-118页 |
| 1.6 稻瘟病菌中Cks1亚细胞定位及时空表达 | 第118-122页 |
| 1.6.1 含Cks1-GFP的互补转化子的获得 | 第118-119页 |
| 1.6.2 Cks1亚细胞定位观察 | 第119-122页 |
| 1.7 稻瘟病菌Cks1蛋白结构域功能研究 | 第122-125页 |
| 1.7.1 稻瘟病菌Cks1中结构域的鉴定 | 第122页 |
| 1.7.2 稻瘟病菌Cks1中结构域缺失突变体表型分析 | 第122-123页 |
| 1.7.3 Cks1及结构域缺失蛋白转录活性检测 | 第123-125页 |
| 1.8 Cks1与Cdc28互作 | 第125-129页 |
| 1.8.1 稻瘟病菌中CDC28基因的鉴定 | 第125-126页 |
| 1.8.2 稻瘟病菌中Cks1与Cdc28互作分析 | 第126-127页 |
| 1.8.3 稻瘟病菌中Cks1对Cdc28定位影响 | 第127-128页 |
| 1.8.4 稻瘟病菌中CDC28基因敲除 | 第128-129页 |
| 2 本章小结 | 第129-132页 |
| 第五章 全文总结及展望 | 第132-139页 |
| 1 结论与讨论 | 第132-137页 |
| 1.1 Znf1是稻瘟病菌附着胞发育与成熟过程中的重要转录因子 | 第132-134页 |
| 1.2 Cks1参与稻瘟病菌致病相关形态分化,细胞周期调控等过程 | 第134-137页 |
| 2 本研究意义及创新 | 第137-138页 |
| 3 后续研究计划 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-148页 |
| 附录1 | 第148-155页 |
| 附录2 | 第155-158页 |
| 个人简历 | 第158页 |
