| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-17页 |
| 1.1 c-Abl和c-Abl抑制剂 | 第12-13页 |
| 1.2 线粒体和活性氧族 | 第13-14页 |
| 1.3 线粒体自噬(mitophagy) | 第14-15页 |
| 1.4 AIF | 第15页 |
| 1.5 本课题拟解决的科学问题 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-27页 |
| 2.1 分子克隆 | 第17-20页 |
| 2.1.1 试剂 | 第17页 |
| 2.1.2 培养基 | 第17页 |
| 2.1.3 定点突变质粒构建、EGFP荧光质粒构建 | 第17-20页 |
| 2.2 细胞实验 | 第20-27页 |
| 2.2.1 试剂及配方 | 第20-22页 |
| 2.2.2 细胞培养与传代 | 第22页 |
| 2.2.3 免疫印记(内源性磷酸化/外源性磷酸化) | 第22-23页 |
| 2.2.4 质谱鉴定磷酸化位点 | 第23-24页 |
| 2.2.5 免疫荧光检测线粒体损伤和AIF在线粒体上的定位 | 第24-25页 |
| 2.2.6 流式细胞术检测ROS | 第25页 |
| 2.2.7 AIF敲低细胞系的建立 | 第25-27页 |
| 第三章 结果 | 第27-41页 |
| 3.1 AIF酪氨酸磷酸化修饰位点鉴定 | 第27-30页 |
| 3.1.1 质谱检测AIF酪氨酸磷酸化修饰位点 | 第27-29页 |
| 3.1.2 免疫印记验证AIF的酪氨酸磷酸化修饰位点 | 第29-30页 |
| 3.2 AIF敲低的A549细胞系线粒体呈现片段化损伤 | 第30-32页 |
| 3.2.1 AIF敲低细胞系的构建结果 | 第30-32页 |
| 3.2.2 AIF RNAi对A549细胞线粒体形态的影响 | 第32页 |
| 3.3 c-Abl抑制剂可能通过AIF介导的线粒体的损伤 | 第32-37页 |
| 3.3.1 c-Abl抑制剂对线粒体的损伤有时间和剂量依赖性,线粒体内膜蛋白AIF与线粒体共定位异常 | 第32-35页 |
| 3.3.2 线粒体锚定型AIF缓解c-Abl抑制剂对线粒体的损伤 | 第35-37页 |
| 3.4 AIF敲低对c-Abl抑制剂诱导A549细胞ROS水平升高的影响 | 第37-38页 |
| 3.5 c-Abl特异性抑制剂尼洛替尼可以诱导线粒体自噬并且抑制自噬体的清除 | 第38页 |
| 3.6 讨论 | 第38-41页 |
| 3.6.1 c-Abl抑制剂STI571通过改变AIF的定位、升高ROS水平介导线粒体损伤 | 第38-39页 |
| 3.6.2 c-Abl抑制剂诱导线粒体自噬,抑制自噬流 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 致谢 | 第45页 |
