| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-17页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征 | 第11页 |
| 1.2 HP-PRRSV感染的流行病学和临床特征 | 第11-13页 |
| 1.2.1 中国HP-PRRSV的出现 | 第11-12页 |
| 1.2.2 亚洲其他国家HP-PRRSV的流行状况 | 第12页 |
| 1.2.3 HP-PRRSV感染的临床特征 | 第12-13页 |
| 1.3 HP-PRRSV感染的病理发病机制 | 第13-15页 |
| 1.3.1 扩大的侵袭性 | 第13页 |
| 1.3.2 肺部损伤 | 第13-14页 |
| 1.3.3 淋巴组织和其他器官的微小病变 | 第14页 |
| 1.3.4 细胞凋亡和胸腺萎缩 | 第14-15页 |
| 1.4 PRRSV NSP2研究进展 | 第15页 |
| 1.5 PRRSV NSP12研究进展 | 第15页 |
| 1.6 PRRSV NSP2和NSP12表位鉴定研究进展 | 第15-16页 |
| 1.7 本课题的意义 | 第16-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 细胞、质粒、菌株及病毒株 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要溶液和培养基的配置 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-25页 |
| 2.2.1 抗原表位预测 | 第18页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第18-19页 |
| 2.2.3 PRRSV Nsp2和Nsp12基因的扩增 | 第19页 |
| 2.2.4 构建Nsp2和Nsp12原核重组质粒 | 第19-20页 |
| 2.2.5 pET-28a-Nsp2和pET-28a-Nsp12的原核表达 | 第20-21页 |
| 2.2.6 纯化His-Nsp2和His-Nsp12蛋白 | 第21页 |
| 2.2.7 免疫小鼠 | 第21页 |
| 2.2.8 细胞融合 | 第21-22页 |
| 2.2.9 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第22-23页 |
| 2.2.10 杂交瘤细胞腹水的制备 | 第23页 |
| 2.2.11 单克隆抗体的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.12 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第24页 |
| 2.2.13 MAb识别抗原表位鉴定 | 第24页 |
| 2.2.14 生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 第三章 HP-PRRSV Nsp2单抗制备及表位鉴定 | 第25-31页 |
| 3.1 NSP2蛋白的原核表达和纯化 | 第25页 |
| 3.2 鉴定单克隆抗体 | 第25-27页 |
| 3.2.1 内源性和外源性表达的 Flag-Nsp2 (1-233aa) 蛋白 | 第25页 |
| 3.2.2 通过间接免疫荧光实验（IFA） | 第25-27页 |
| 3.3 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第27页 |
| 3.4 4A12抗原表位的鉴定 | 第27-29页 |
| 3.5 抗原表位保守性分析及应用 | 第29-31页 |
| 第四章 HP-PRRSV Nsp12单抗制备及表位鉴定 | 第31-37页 |
| 4.1 原核重组质粒的原核表达 | 第31页 |
| 4.2 鉴定单克隆抗体 | 第31-32页 |
| 4.2.1 内源性和外源性表达的Nsp12蛋白 | 第31-32页 |
| 4.2.2 通过间接免疫荧光实验（IFA） | 第32页 |
| 4.3 单克隆抗体亚型鉴定 | 第32-33页 |
| 4.4 1E5抗原表位鉴定 | 第33-35页 |
| 4.5 抗原表位的定位与结构分析 | 第35页 |
| 4.6 抗原表位保守性分析及应用 | 第35-37页 |
| 第五章 讨论 | 第37-39页 |
| 第六章 全文结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 作者简历 | 第47页 |
