| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 研究背景及意义 | 第15页 |
| 1.2 茧丝产量的研究现状 | 第15-17页 |
| 1.2.1 家蚕茧丝性状概述 | 第15页 |
| 1.2.2 分子生物学技术在茧丝性状研究中的应用 | 第15-16页 |
| 1.2.3 家蚕数量性状QTL定位研究 | 第16页 |
| 1.2.4 家蚕茧丝性状在基因组学水平上的研究 | 第16-17页 |
| 1.3 丝腺相关基因 | 第17-19页 |
| 1.3.1 家蚕丝腺的构造及生理功能 | 第17-18页 |
| 1.3.2 丝蛋白基因的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 家蚕丝蛋白基因的转录调控 | 第19-21页 |
| 1.4.1 丝素基因的顺式调控元件 | 第20页 |
| 1.4.2 丝蛋白基因的反式作用因子 | 第20-21页 |
| 1.5 基因组定点编辑技术 | 第21-22页 |
| 1.5.1 CRISPR/Cas 技术 | 第21页 |
| 1.5.2 CRISPR/Cas 技术的优点以及应用 | 第21-22页 |
| 1.6 本研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 第2章 两种不同产丝量家蚕丝腺的转录组比较分析 | 第23-41页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第23-26页 |
| 2.2.1 家蚕 | 第23页 |
| 2.2.2 主要实验仪器和设备 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第24页 |
| 2.2.4 常用溶液的配制 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.3.1 样品准备 | 第26页 |
| 2.3.2 RNA提取和文库构建 | 第26-27页 |
| 2.3.3 转录组测序和质量控制 | 第27页 |
| 2.3.4 差异表达基因的分析 | 第27页 |
| 2.3.5 GO功能注释和KEGG富集通路分析 | 第27页 |
| 2.3.6 反转录反应 | 第27-28页 |
| 2.3.7 cDNA扩增反应及电泳检测 | 第28页 |
| 2.3.8 切胶回收 | 第28-29页 |
| 2.3.9 PCR产物的连接、转化及克隆测序 | 第29-30页 |
| 2.3.10 qRT-PCR验证分析 | 第30-31页 |
| 2.4 实验结果 | 第31-38页 |
| 2.4.1 转录组测序结果的概述 | 第31-32页 |
| 2.4.2 丝腺中的差异表达基因（DEGs） | 第32页 |
| 2.4.3 KEGG，GO注释和富集分析 | 第32-34页 |
| 2.4.4 qRT-PCR的结果分析 | 第34-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-41页 |
| 2.5.1 丝腺中的富集通路主要于蛋白质的合成有关 | 第38页 |
| 2.5.2 差异表达基因在L10中上调 | 第38-39页 |
| 2.5.3 差异表达基因在JS中上调 | 第39-41页 |
| 第3章 丝蛋白合成相关转录因子分析 | 第41-49页 |
| 3.1 前言 | 第41页 |
| 3.2 材料方法 | 第41-42页 |
| 3.2.1 转录因子数据及通路相关基因的获取 | 第41页 |
| 3.2.2 靶标基因富集分析 | 第41-42页 |
| 3.2.3 实验材料 | 第42页 |
| 3.2.4 实验试剂及仪器设备 | 第42页 |
| 3.2.5 实验方法 | 第42页 |
| 3.3 结果讨论 | 第42-46页 |
| 3.3.1 果蝇转录因子及其靶标基因的通路注释 | 第42-44页 |
| 3.3.2 同源蛋白寻找同源基因的转录因子 | 第44-46页 |
| 3.4 trx基因表达模式的测定 | 第46页 |
| 3.5 丝腺因子（SGF1）表达谱的测定 | 第46-49页 |
| 第4章 基因trx和SGF1的功能验证 | 第49-59页 |
| 4.1 前言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料、试剂和设备 | 第49页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第49页 |
| 4.2.2 主要试剂和试验仪器 | 第49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-54页 |
| 4.3.0 靶点选择与克隆测序引物设计 | 第49页 |
| 4.3.1 家蚕基因组DNA的提取以及突变检测 | 第49-50页 |
| 4.3.2 sgRNA靶点选择及sgRNA模板获得 | 第50页 |
| 4.3.3 克隆测序 | 第50-51页 |
| 4.3.4 质粒抽提 | 第51页 |
| 4.3.5 体外转录Cas9 mRNA | 第51-52页 |
| 4.3.6 sgRNA的合成与纯化 | 第52页 |
| 4.3.7 构建质粒 | 第52-54页 |
| 4.3.8 显微注射 | 第54页 |
| 4.4 结果与分析 | 第54-57页 |
| 4.4.1 trx 和 SGF1 的 g RNA 转基因家蚕获得 | 第54-55页 |
| 4.4.2 trx 和 SGF1 的 g RNA 转基因家蚕与表达 Cas9 转基因家蚕杂交 | 第55-57页 |
| 4.5 讨论与展望 | 第57-59页 |
| 第5章 茧丝相关基因的时空差异表达比较分析 | 第59-65页 |
| 5.1 前言 | 第59页 |
| 5.2 材料与试剂 | 第59页 |
| 5.2.1 主要实验仪器 | 第59页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第59页 |
| 5.2.3 常用溶液的配制 | 第59页 |
| 5.3 方法 | 第59-60页 |
| 5.3.1 材料准备 | 第59页 |
| 5.3.2 茧层中丝胶含量的比较 | 第59-60页 |
| 5.3.3 家蚕中、后部丝腺总RNA的提取 | 第60页 |
| 5.3.4 反转录反应以及设计cDNA扩增引物 | 第60页 |
| 5.3.5 扩增区片段克隆测序验证 | 第60页 |
| 5.3.6 qRT-PCR技术分析丝腺基因在L10与JS中的表达 | 第60页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第60-63页 |
| 5.4.1 qRT-PCRPCR的结果分析 | 第60-62页 |
| 5.4.2 丝胶率在L10与JS中的比较 | 第62-63页 |
| 5.5 讨论 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
