| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 Pif1解旋酶在不同物种中的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.1 ScPif1解旋酶在酿酒酵母中的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1.1 ScPif1在细胞核中的功能 | 第13-14页 |
| 1.1.1.2 ScPif1帮助冈崎片段加工成熟 | 第14页 |
| 1.1.1.3 ScPif1对rDNA复制的影响 | 第14页 |
| 1.1.1.4 ScPif1解旋酶在线粒体中的作用 | 第14-15页 |
| 1.1.1.5 ScPif1的体外生化活性研究 | 第15页 |
| 1.1.2 ScRrm3解旋酶在酿酒酵母中的研究 | 第15页 |
| 1.1.3 Pif1家族解旋酶在裂殖酵母中的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.1.4 人类Pif1解旋酶 | 第16页 |
| 1.1.5 小鼠中Pif1解旋酶 | 第16-17页 |
| 1.2 G4结构和G4 DNA | 第17-18页 |
| 1.3 DNA结合活性研究方法 | 第18-20页 |
| 1.3.1 凝胶阻滞实验 | 第18-19页 |
| 1.3.2 荧光各向异性实验 | 第19页 |
| 1.3.3 圆二色谱实验 | 第19-20页 |
| 1.3.4 Stopped-flow技术 | 第20页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 TyPif1解旋酶表达载体构建以蛋白表达纯化 | 第22-40页 |
| 2.1 材料 | 第22-27页 |
| 2.1.1 质粒、菌种以及试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 引物名称及序列 | 第22-23页 |
| 2.1.3 配制的主要溶液 | 第23-27页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 overlap方法点突变TyPif1基因 | 第27-29页 |
| 2.2.1.1 PCR扩增TyPif1编码序列的两个片段 | 第27-28页 |
| 2.2.1.2 1%琼脂糖凝胶电泳检测、切胶并用试剂盒回收: | 第28页 |
| 2.2.1.3 再次做PCR扩增全长基因： | 第28-29页 |
| 2.2.1.4 1%琼脂糖凝胶电泳检测、切胶并用试剂盒回收 | 第29页 |
| 2.2.2 表达载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.2.1 双酶切载体、基因片段和SUMO标签 | 第29-30页 |
| 2.2.2.2 目的基因、SUMO标签和载体连接 | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 感受态细胞的制备和转化 | 第31页 |
| 2.2.2.4 目的基因的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.3 蛋白表达纯化 | 第32-35页 |
| 2.2.3.1 小样表达纯化 | 第33页 |
| 2.2.3.2 大样表达纯化 | 第33-35页 |
| 2.3 实验结果 | 第35-38页 |
| 2.3.1 overlap获得全长野生型TyPif1编码序列 | 第35-36页 |
| 2.3.2 表达载体构建 | 第36-37页 |
| 2.3.3 小样表达TyPif1解旋酶摸索表达条件 | 第37页 |
| 2.3.4 大量表达纯化TyPif1解旋酶 | 第37-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 TyPif1解旋酶的活性分析 | 第40-47页 |
| 3.1 材料与方法 | 第40-44页 |
| 3.1.1 材料 | 第40-42页 |
| 3.1.1.1 实验所用的蛋白和底物 | 第40页 |
| 3.1.1.2 试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.1.3 实验仪器 | 第41-42页 |
| 3.1.2 方法 | 第42-44页 |
| 3.1.2.1 DNA底物的制备 | 第42页 |
| 3.1.2.2 TyPif1解旋酶的DNA结合能力测定 | 第42-43页 |
| 3.1.2.3 TyPif1解旋酶的DNA解旋活力测定 | 第43-44页 |
| 3.2 结果与分析 | 第44-46页 |
| 3.2.1 TyPif1解旋酶的DNA结合能力分析 | 第44-45页 |
| 3.2.1.1 TyPif1解旋酶与DNA底物的结合具有偏好性 | 第44页 |
| 3.2.1.2 TyPif1解旋酶与DNA底物结合的Binding size计算 | 第44-45页 |
| 3.2.2 TyPif1解旋酶的DNA解旋活力分析 | 第45-46页 |
| 3.2.2.1 TyPif1解旋酶的解螺旋活性与温度的关系 | 第45页 |
| 3.2.2.2 TyPif1解旋酶解旋DNA底物的偏好性 | 第45-46页 |
| 3.3 结论 | 第46-47页 |
| 第四章 TyPif1解旋酶的热稳定性分析 | 第47-49页 |
| 4.1 材料与方法 | 第47页 |
| 4.1.1 材料 | 第47页 |
| 4.1.1.1 实验所用蛋白及分子生物学试剂 | 第47页 |
| 4.1.1.2 主要溶液 | 第47页 |
| 4.1.2 方法 | 第47页 |
| 4.2 结果与分析 | 第47-48页 |
| 4.3 讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 结论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 缩略词 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
