| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号表 | 第8-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-37页 |
| 1.1 新城疫概述 | 第13-27页 |
| 1.1.1 NDV的病原学特征 | 第13-15页 |
| 1.1.2 NDV的分子生物学特性 | 第15-22页 |
| 1.1.3 ND的流行病学 | 第22-23页 |
| 1.1.4 ND疫苗研究进展 | 第23-27页 |
| 1.2 减毒沙门菌作为疫苗活载体的研究进展 | 第27-35页 |
| 1.2.1 沙门菌减毒相关基因 | 第28-29页 |
| 1.2.2 减毒沙门菌侵入机体免疫系统的机制 | 第29-30页 |
| 1.2.3 减毒沙门菌递呈质粒DNA的机制 | 第30-31页 |
| 1.2.4 减毒沙门菌递呈外源抗原诱导宿主免疫应答的机制 | 第31页 |
| 1.2.5 减毒沙门菌疫苗活载体的优缺点 | 第31-32页 |
| 1.2.6 减毒沙门菌作为疫苗活载体的应用 | 第32-34页 |
| 1.2.7 减毒沙门菌活载体表达系统的优化策略 | 第34-35页 |
| 1.3 展望 | 第35-37页 |
| 第2章 重组减毒鸡白痢沙门菌平衡致死真核递呈系统的构建及其特性研究 | 第37-63页 |
| 2.1 材料 | 第37-41页 |
| 2.1.1 菌株、细胞、质粒及实验动物 | 第37-38页 |
| 2.1.2 主要试剂和培养基 | 第38页 |
| 2.1.3 主要培养基和试剂的配制 | 第38-41页 |
| 2.1.4 主要实验器材 | 第41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-54页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第41页 |
| 2.2.2 目的基因的扩增 | 第41-42页 |
| 2.2.3 凝胶产物的回收 | 第42页 |
| 2.2.4 PCR产物与pMD19-T载体的连接 | 第42-43页 |
| 2.2.5 大肠杆菌JM109感受态的制备 | 第43页 |
| 2.2.6 大肠杆菌的转化 | 第43页 |
| 2.2.7 质粒的提取 | 第43-44页 |
| 2.2.8 重组质粒pMD19-T-SD-asd的PCR及酶切鉴定 | 第44页 |
| 2.2.9 真核互补质粒pc D-asd的构建 | 第44-47页 |
| 2.2.10 大肠杆菌χ6097 感受态的制备 | 第47-48页 |
| 2.2.11 大肠杆菌χ6097 的转化 | 第48页 |
| 2.2.12 真核互补质粒pc D-asd的鉴定 | 第48页 |
| 2.2.13 大肠杆菌χ6097 (pcD-asd)的稳定性试验 | 第48-49页 |
| 2.2.14 大肠杆菌χ6097 (pcD-asd)的氨苄耐药性试验 | 第49页 |
| 2.2.15 重组质粒pc D-asd-egfp的构建及鉴定 | 第49-50页 |
| 2.2.16 重组质粒pc D-asd-egfp转染实验 | 第50页 |
| 2.2.17 沙门菌Δcrp?asdC79-13 感受态的制备 | 第50-51页 |
| 2.2.18 沙门菌的电转化 | 第51页 |
| 2.2.19 重组菌株的PCR及酶切鉴定 | 第51页 |
| 2.2.20 重组菌株的表型及生化鉴定 | 第51页 |
| 2.2.21 重组质粒pc D-asd-egfp在菌株中的稳定性检测 | 第51-52页 |
| 2.2.22 重组菌株的生长特性鉴定 | 第52页 |
| 2.2.23 重组菌株侵染鸡胚成纤维细胞及表达蛋白的Western Blot分析 | 第52-53页 |
| 2.2.24 重组菌株对雏鸡的毒性试验 | 第53-54页 |
| 2.3 结果与分析 | 第54-60页 |
| 2.3.1 无抗性真核互补质粒的构建及鉴定 | 第54页 |
| 2.3.2 大肠杆菌χ6097(pcD-asd)的稳定性及氨苄耐药性试验 | 第54-55页 |
| 2.3.3 重组质粒pcD-asd-egfp转染实验 | 第55页 |
| 2.3.4 重组菌株的构建及鉴定 | 第55-56页 |
| 2.3.5 重组菌株的表型及生化鉴定 | 第56页 |
| 2.3.6 重组质粒在重组菌株中的稳定性检测 | 第56-57页 |
| 2.3.7 重组菌株的生长特性鉴定 | 第57页 |
| 2.3.8 重组菌株侵染CEF细胞及EGFP蛋白的Western Blot分析 | 第57-59页 |
| 2.3.9 重组菌株对雏鸡的毒性试验 | 第59-60页 |
| 2.4 讨论 | 第60-63页 |
| 第3章 携带NDV HN/F基因的重组减毒鸡白痢沙门菌构建及其生物学特性研究 | 第63-79页 |
| 3.1 材料 | 第64-65页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第64页 |
| 3.1.2 主要试剂和培养基 | 第64-65页 |
| 3.1.3 主要培养基和试剂的配制 | 第65页 |
| 3.1.4 主要实验器材 | 第65页 |
| 3.2 方法 | 第65-68页 |
| 3.2.1 引物的设计与合成 | 第65页 |
| 3.2.2 NDV La Sota株RNA的提取 | 第65-66页 |
| 3.2.3 RT-PCR扩增NDV La Sota株的HN/F基因 | 第66页 |
| 3.2.4 PCR产物与pMD19-T载体的连接与转化 | 第66-67页 |
| 3.2.5 重组质粒pMD19-T-HN/F的PCR及酶切鉴定 | 第67页 |
| 3.2.6 重组质粒pcD-asd-HN/F的构建及鉴定 | 第67页 |
| 3.2.7 重组质粒转染Vero细胞及蛋白表达检测 | 第67页 |
| 3.2.8 重组菌株C79-13Δcrp?asd(pc D-asd-HN/F)的PCR及酶切鉴定 | 第67页 |
| 3.2.9 重组菌株的表型及生化鉴定 | 第67页 |
| 3.2.10 重组质粒在菌株中的稳定性检测 | 第67页 |
| 3.2.11 重组菌株在鸡只体内的稳定性检测 | 第67-68页 |
| 3.2.12 重组菌株的生长特性鉴定 | 第68页 |
| 3.2.13 重组菌株侵染CEF细胞及HN/F蛋白的Western Blot分析 | 第68页 |
| 3.2.14 重组菌株对雏鸡的毒性试验 | 第68页 |
| 3.3 结果与分析 | 第68-75页 |
| 3.3.1 NDV La Sota株的HN/F基因RT-PCR鉴定 | 第68-69页 |
| 3.3.2 重组质粒pcD-asd-HN/F的构建及鉴定 | 第69页 |
| 3.3.3 重组质粒转染Vero细胞及HN/F蛋白的Western Blot分析 | 第69-70页 |
| 3.3.4 重组菌株Δcrp?asd C79-13 (pcD-asd-HN/F)的鉴定 | 第70页 |
| 3.3.5 重组菌株Δcrp?asd C79-13 (pcD-asd-HN/F)的表型及生化鉴定 | 第70-71页 |
| 3.3.6 重组菌株Δcrp?asd C79-13 (pcD-asd-HN/F)的体外稳定性检测 | 第71页 |
| 3.3.7 重组菌株Δcrp?asd C79-13 (pcD-asd-HN/F)的体内稳定性检测 | 第71-72页 |
| 3.3.8 重组菌株Δcrp?asd C79-13 (pcD-asd-HN/F)的生长特性鉴定 | 第72-73页 |
| 3.3.9 重组菌株侵染CEF细胞及HN/F蛋白的Western Blot分析 | 第73-74页 |
| 3.3.10 重组菌株对雏鸡的毒性试验 | 第74-75页 |
| 3.4 讨论 | 第75-79页 |
| 第4章 携带NDV HN/F基因的重组减毒鸡白痢沙门菌免疫学特性研究 | 第79-93页 |
| 4.1 材料 | 第79-81页 |
| 4.1.1 菌株及实验动物 | 第79-80页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第80页 |
| 4.1.3 主要试剂的配制 | 第80-81页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第81页 |
| 4.2 方法 | 第81-84页 |
| 4.2.1 雏鸡的免疫分组 | 第81页 |
| 4.2.2 免疫后鸡只体重计量及样本采集 | 第81-82页 |
| 4.2.3 NDV抗体水平的检测 | 第82-83页 |
| 4.2.4 酶联免疫吸附检测沙门菌Ig G抗体 | 第83页 |
| 4.2.5 酶联免疫吸附检测鸡消化道sIgA抗体水平 | 第83页 |
| 4.2.6 淋巴细胞增殖试验 | 第83-84页 |
| 4.2.7 酶联免疫吸附检测细胞因子IFN-γ水平 | 第84页 |
| 4.2.8 重组菌株对鸡的免疫保护效力试验 | 第84页 |
| 4.2.9 统计与分析 | 第84页 |
| 4.3 结果与分析 | 第84-91页 |
| 4.3.1 免疫后鸡只体重的变化 | 第84-85页 |
| 4.3.2 免疫后鸡只免疫器官指数的影响 | 第85-86页 |
| 4.3.3 NDV抗体水平的动态变化规律 | 第86-87页 |
| 4.3.4 沙门菌Ig G抗体的动态变化规律 | 第87-88页 |
| 4.3.5 消化道sIgA抗体水平的动态变化规律 | 第88-89页 |
| 4.3.6 免疫雏鸡淋巴细胞增殖反应 | 第89页 |
| 4.3.7 细胞因子IFN-γ水平的动态变化规律 | 第89-90页 |
| 4.3.8 免疫鸡只对强毒攻击的免疫保护效果 | 第90-91页 |
| 4.4 讨论 | 第91-93页 |
| 第5章 结论 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-107页 |
| 附录A 主要仪器设备 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 硕士期间的研究成果 | 第111页 |
