| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 红麻概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 红麻的简介 | 第12页 |
| 1.1.2 红麻韧皮纤维的化学组成 | 第12页 |
| 1.1.3 红麻的用途 | 第12-13页 |
| 1.2 果胶的概述 | 第13-15页 |
| 1.2.1 果胶的结构组成 | 第13-14页 |
| 1.2.2 果胶的作用 | 第14-15页 |
| 1.3 半乳糖醛酸寡糖的研究 | 第15-17页 |
| 1.3.1 半乳糖醛酸寡糖结构 | 第15页 |
| 1.3.2 半乳糖醛酸寡糖的生物功效 | 第15-16页 |
| 1.3.3 半乳糖醛酸寡糖的来源 | 第16-17页 |
| 1.4 红麻脱胶的研究 | 第17-21页 |
| 1.4.1 麻纤维与原麻的关系 | 第17页 |
| 1.4.2 红麻脱胶的途径及研究现状 | 第17-18页 |
| 1.4.3 酶法脱胶的研究 | 第18-20页 |
| 1.4.3.1 果胶酶的分类 | 第18-19页 |
| 1.4.3.2 碱性果胶酶的简介 | 第19页 |
| 1.4.3.3 果胶酶脱胶的机理 | 第19-20页 |
| 1.4.4 果胶酶生物脱胶的研究现状 | 第20-21页 |
| 1.4.4.1 产果胶酶微生物的选育 | 第20页 |
| 1.4.4.2 果胶酶基因工程菌的选育 | 第20-21页 |
| 1.5 本研究的意义、目的及内容 | 第21-22页 |
| 第二章 菌株的鉴定及所产粗酶液脱胶能力确定 | 第22-29页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验用试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 粗酶液的制备 | 第23页 |
| 2.2.2 菌株 11-2 所产粗酶液对红麻脱胶能力的确定 | 第23页 |
| 2.2.3 CTAB法提取菌株 11-2 基因组 | 第23-24页 |
| 2.2.4 提取 16S rDNA测序鉴定菌种类别 | 第24-25页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.3.1 菌株 11-2 所产粗酶液对红麻脱胶能力的确定 | 第25-26页 |
| 2.3.2 CTAB法提取菌株 11-2 基因组的结果 | 第26页 |
| 2.3.3 16S rDNA提取及鉴定结果 | 第26-29页 |
| 2.3.3.1 菌株 11-2 的 16S rDNA的提取结果 | 第26-27页 |
| 2.3.3.2 红麻脱胶菌株 11-2 的 16S rDNA鉴定序列 | 第27-29页 |
| 第三章 11-2 粗酶液对红麻脱胶过程中糖类及残胶率测定 | 第29-38页 |
| 3.1 材料及仪器 | 第29-30页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第29页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第29-30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-32页 |
| 3.2.1 菌株 11-2 粗酶液对红麻脱胶过程中还原糖含量的变化 | 第30-31页 |
| 3.2.1.1 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第30页 |
| 3.2.1.2 粗酶液对红麻鲜麻皮脱胶过程中不同时间还原糖量 | 第30-31页 |
| 3.2.1.3 粗酶液对带杆红麻脱胶过程中不同时间还原糖含量 | 第31页 |
| 3.2.2 菌株 11-2 所产酶液对红麻脱胶过程中总糖含量的变化 | 第31-32页 |
| 3.2.2.1 苯酚-硫酸法测总糖标准曲线绘制 | 第31页 |
| 3.2.2.2 粗酶液对红麻鲜麻皮脱胶过程中不同时间总糖含量 | 第31页 |
| 3.2.2.3 粗酶液对带杆红麻过程中不同时间总糖含量 | 第31-32页 |
| 3.2.3 菌株 11-2 所产酶液对红麻脱胶过程中残胶率变化 | 第32页 |
| 3.2.3.1 残胶率的测定方法 | 第32页 |
| 3.2.3.2 测定粗酶液对红麻脱胶作用后不同时间时的残胶率 | 第32页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第32-38页 |
| 3.3.1 菌株 11-2 所产酶液对红麻脱胶过程中还原糖含量的变化 | 第32-34页 |
| 3.3.1.1 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第32-33页 |
| 3.3.1.2 粗酶液对红麻鲜麻皮脱胶过程中不同时间还原糖量 | 第33-34页 |
| 3.3.1.3 粗酶液对红麻鲜麻带杆脱胶过程中不同时间还原糖含量 | 第34页 |
| 3.3.2 菌株 11-2 所产酶液对红麻脱胶过程中总糖含量的变化 | 第34-36页 |
| 3.3.2.1 苯酚-硫酸法测总糖标准曲线绘制 | 第34-35页 |
| 3.3.2.2 粗酶液对红麻鲜麻皮脱胶过程中不同时间总糖含量 | 第35-36页 |
| 3.3.2.3 粗酶液对红麻带杆鲜麻脱胶过程中不同时间总糖含量 | 第36页 |
| 3.3.3 菌株 11-2 所产酶液对红麻脱胶过程中残胶率变化 | 第36-38页 |
| 第四章 粗酶液与商品果胶酶对红麻脱胶作用比较 | 第38-47页 |
| 4.1 实验材料及仪器 | 第38-39页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第38页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第38页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第38-39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 4.2.1 SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳技术 | 第39页 |
| 4.2.2 菌 11-2 粗酶液对红麻脱胶后产物的研究 | 第39-40页 |
| 4.2.2.1 粗酶液对红麻鲜麻皮和带杆鲜麻作用后产物在TLC板上分布 | 第39-40页 |
| 4.2.2.2 粗酶液对商品果胶作用后产物在TLC板上分布 | 第40页 |
| 4.2.2.3 粗酶液对红麻脱胶后和对商品果胶作用后产物对比 | 第40页 |
| 4.2.3 菌 11-2 粗酶液与两种商品酶对红麻脱胶后产物的对比 | 第40页 |
| 4.2.3.1 对比三种酶对红麻脱胶后产物 | 第40页 |
| 4.2.3.2 对比三种酶对商品果胶后产物的分布 | 第40页 |
| 4.2.4 菌 11-2 粗酶液与两种商品酶对红麻脱胶能力比较 | 第40-41页 |
| 4.2.4.1 蛋白量相同的三种酶在SDS-PAGE中的分布 | 第40页 |
| 4.2.4.2 蛋白量相同的三种酶对红麻脱胶能力比较 | 第40-41页 |
| 4.3 实验结果及讨论 | 第41-47页 |
| 4.3.1 菌 11-2 粗酶液对红麻脱胶后产物的研究 | 第41-43页 |
| 4.3.1.1 粗酶液对红麻鲜麻皮和带杆鲜麻作用后产物在TLC板上分布 | 第41-42页 |
| 4.3.1.2 粗酶液对商品果胶作用后产物在TLC板上分布 | 第42页 |
| 4.3.1.3 粗酶液对红麻脱胶后和对商品果胶作用后产物对比 | 第42-43页 |
| 4.3.2 菌 11-2 粗酶液与两种商品酶对红麻脱胶后产物的对比 | 第43-45页 |
| 4.3.2.1 对比三种酶对红麻脱胶后产物的差异 | 第43-44页 |
| 4.3.2.2 对比三种酶对商品果胶后产物的分布 | 第44-45页 |
| 4.3.3 菌 11-2 粗酶液与两种商品酶对红麻脱胶能力比较 | 第45-47页 |
| 4.3.3.1 蛋白量相同的三种酶在SDS-PAGE中的分布 | 第45-46页 |
| 4.3.3.2 蛋白量相同的三种酶对红麻脱胶能力比较 | 第46-47页 |
| 第五章 粗酶液中分离纯化红麻脱胶酶 | 第47-54页 |
| 5.1 实验材料及仪器 | 第47-48页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第47页 |
| 5.1.2 实验试剂及配制 | 第47页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第47-48页 |
| 5.2 实验方法 | 第48页 |
| 5.2.1 硫铵沉淀法对菌株 11-2 产粗酶液进行分离纯化 | 第48页 |
| 5.2.2 对筛选所得的对红麻脱胶酶条带做质谱鉴定 | 第48页 |
| 5.2.3 根据质谱测序的结果确定编码两种酶的基因序列 | 第48页 |
| 5.3 实验结果及分析 | 第48-54页 |
| 5.3.1 硫铵沉淀法对菌株 11-2 产粗酶液分离纯化红麻脱胶酶 | 第48-49页 |
| 5.3.2 对筛选所得的对红麻脱胶酶条带做质谱分析 | 第49-52页 |
| 5.3.3 根据质谱测序的结果确定编码两种酶的基因序列 | 第52-54页 |
| 第六章 两个果胶裂解酶基因G7、F19的外源表达 | 第54-71页 |
| 6.1 实验材料及仪器 | 第54-55页 |
| 6.1.1 实验试剂 | 第54页 |
| 6.1.2 常用培养基 | 第54-55页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第55页 |
| 6.2 实验方法 | 第55-60页 |
| 6.2.1 两个目的基因与PMD-18T质粒的构建 | 第55-57页 |
| 6.2.1.1 两个目的基因G7、F19从菌株 11-2 基因组上扩增 | 第55-56页 |
| 6.2.1.2 扩增出来的目的基因进行胶回收 | 第56页 |
| 6.2.1.3 目的基因末端加A及直接纯化 | 第56页 |
| 6.2.1.4 目的基因与PMD-18T连接 | 第56页 |
| 6.2.1.5 热击转化 | 第56-57页 |
| 6.2.1.6 菌落PCR鉴定 | 第57页 |
| 6.2.1.7 质粒提取及鉴定 | 第57页 |
| 6.2.2 两个目的基因与PET-28a表达质粒的构建 | 第57-59页 |
| 6.2.2.1 PET-28a质粒载体用限制性内切酶酶切 | 第57-58页 |
| 6.2.2.2 将两个目的基因G7、F19从连接好的T载体质粒中扩增出来 | 第58页 |
| 6.2.2.3 目的片段胶回收并用限制性内切酶酶切 | 第58-59页 |
| 6.2.2.4 将目的片段与PET-28a连接 | 第59页 |
| 6.2.2.5 热击转化 | 第59页 |
| 6.2.2.6 菌落PCR | 第59页 |
| 6.2.3 大肠杆菌诱导表达 | 第59-60页 |
| 6.2.3.1 两个果胶裂解酶外源表达鉴定 | 第59-60页 |
| 6.2.3.2 两个外源表达果胶裂解酶酶活鉴定 | 第60页 |
| 6.3 实验结果及讨论 | 第60-71页 |
| 6.3.1 两个目的基因与PMD-18T载体的构建 | 第60-63页 |
| 6.3.1.1 两个目的基因G7、F19从菌株 11-2 基因组上扩增 | 第60-61页 |
| 6.3.1.2 胶回收 | 第61页 |
| 6.3.1.3 目的基因末端加A和纯化结果 | 第61-62页 |
| 6.3.1.4 菌落PCR鉴定结果 | 第62-63页 |
| 6.3.1.5 质粒提取 | 第63页 |
| 6.3.2 构建G7、F19目的基因的表达载体 | 第63-67页 |
| 6.3.2.1 PET-28a质粒载体用限制性内切酶酶切 | 第63-64页 |
| 6.3.2.2 寻找两个目的基因从T载体质粒中PCR扩增的最适退火温度 | 第64页 |
| 6.3.2.3 目的片段胶回收 | 第64-65页 |
| 6.3.2.4 目的片段用限制性内切酶进行酶切 | 第65页 |
| 6.3.2.5 菌落PCR | 第65-66页 |
| 6.3.2.6 提取质粒测序并酶切鉴定 | 第66-67页 |
| 6.3.3 大肠杆菌诱导表达 | 第67-71页 |
| 6.3.3.1 两个果胶裂解酶外源表达鉴定 | 第67-69页 |
| 6.3.3.2 两个外源表达的果胶裂解酶酶活鉴定 | 第69-71页 |
| 第七章 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
