| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 中英文缩略词对照表 | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 腈水合酶概述 | 第9-11页 |
| 1.1.1 腈水合酶的来源 | 第9页 |
| 1.1.2 腈水合酶的结构和分类 | 第9-10页 |
| 1.1.3 腈水合酶的催化机理 | 第10-11页 |
| 1.1.4 腈水合酶的异源表达 | 第11页 |
| 1.2 腈水合酶的应用 | 第11页 |
| 1.3 烟酰胺概述 | 第11-12页 |
| 1.3.1 烟酰胺简介 | 第11-12页 |
| 1.3.2 国内外烟酰胺生产及消费状况 | 第12页 |
| 1.4 烟酰胺生产工艺 | 第12-13页 |
| 1.4.1 化学合成法 | 第12页 |
| 1.4.2 微生物发酵合成法 | 第12-13页 |
| 1.5 重组大肠杆菌的高密度发酵 | 第13-14页 |
| 1.5.1 高密度发酵技术概述 | 第13页 |
| 1.5.2 影响大肠杆菌高密度发酵的条件 | 第13-14页 |
| 1.6 本课题立题依据、意义及主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| 2.1 菌种与质粒 | 第15页 |
| 2.2 主要试剂 | 第15页 |
| 2.3 主要溶液 | 第15-17页 |
| 2.4 主要设备与仪器 | 第17页 |
| 2.5 培养基 | 第17-18页 |
| 2.5.1 种子培养基 | 第17页 |
| 2.5.2 发酵培养基 | 第17页 |
| 2.5.3 微量元素溶液 | 第17-18页 |
| 2.6 培养方法 | 第18页 |
| 2.6.1 种子培养 | 第18页 |
| 2.6.2 摇瓶发酵培养和腈水合酶的诱导表达 | 第18页 |
| 2.6.3 5L发酵罐的分批-补料培养 | 第18页 |
| 2.6.4 补料策略 | 第18页 |
| 2.7 培养基优化 | 第18-19页 |
| 2.7.1 单因素优化 | 第19页 |
| 2.7.2 正交试验设计及分析 | 第19页 |
| 2.8 烟酰胺生产工艺 | 第19-20页 |
| 2.8.1 底物流加合成烟酰胺工艺 | 第19页 |
| 2.8.2 底物分批补料合成烟酰胺工艺 | 第19-20页 |
| 2.8.3 底物添加量优化 | 第20页 |
| 2.8.4 酶蛋白的底物产物耐受性 | 第20页 |
| 2.9 保护剂和金属离子对催化稳定性的影响 | 第20-21页 |
| 2.9.1 保护剂种类和浓度对催化稳定性的影响 | 第20-21页 |
| 2.9.2 金属离子种类和浓度对催化稳定性的影响 | 第21页 |
| 2.10 分析方法 | 第21-23页 |
| 2.10.1 细胞干重的测定 | 第21页 |
| 2.10.2 细胞催化活力、烟酰胺和烟腈浓度的测定 | 第21页 |
| 2.10.3 SDS-PAGE检测 | 第21-22页 |
| 2.10.4 发酵罐培养中葡萄糖和乙酸的测定 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-39页 |
| 3.1 重组菌产腈水合酶培养基优化 | 第23-27页 |
| 3.1.1 碳源对细胞生长和催化活力的影响 | 第23-24页 |
| 3.1.2 氮源对细胞生长和催化活力的影响 | 第24页 |
| 3.1.3 钴离子对细胞生长和催化活力的影响 | 第24-25页 |
| 3.1.4 培养基正交试验设计 | 第25-27页 |
| 3.2 两种重组菌催化性能比较及全细胞烟酰胺生产工艺建立 | 第27-30页 |
| 3.2.1 底物流加合成烟酰胺工艺 | 第27-28页 |
| 3.2.2 底物分批补料合成烟酰胺工艺 | 第28-29页 |
| 3.2.3 两种酶的底物产物耐受性 | 第29-30页 |
| 3.2.4 底物添加量优化 | 第30页 |
| 3.3 重组菌BAG 5L发酵罐发酵优化 | 第30-34页 |
| 3.3.1 指数流加碳源策略 | 第30-31页 |
| 3.3.2 乳糖浓度对菌体生长和产酶的影响 | 第31-32页 |
| 3.3.3 钴离子浓度对菌体生长和产酶的影响 | 第32-33页 |
| 3.3.4 高密度菌体催化烟腈比较 | 第33-34页 |
| 3.4 保护剂和金属离子对催化稳定性的影响 | 第34-39页 |
| 3.4.1 保护剂种类和浓度对催化稳定性的影响 | 第34-35页 |
| 3.4.2 金属离子种类和浓度对催化稳定性的影响 | 第35-36页 |
| 3.4.3 金属离子在催化过程中的影响 | 第36-39页 |
| 第四章 主要结论与展望 | 第39-40页 |
| 主要结论 | 第39页 |
| 展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 附录A：菌体干重与A_(600)标准曲线、烟腈和烟酰胺标准曲线及烟腈和烟酰胺样品HPLC色谱图 | 第46-48页 |
| 附录B：作者在攻读硕士学位期间发表的论文与专利 | 第48页 |
