| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 黄热病毒及其疫苗 | 第12-15页 |
| 1.1.1 黄热病毒简介 | 第12页 |
| 1.1.2 黄热病的免疫与治疗 | 第12-13页 |
| 1.1.3 YF-17D疫苗的不良反应 | 第13页 |
| 1.1.4 YF DNA疫苗 | 第13-14页 |
| 1.1.5 灭活YFV疫苗 | 第14-15页 |
| 1.1.6 YFV亚单位疫苗 | 第15页 |
| 1.2 日本脑炎疫苗SA14-14-2及以其为骨架构建的嵌合疫苗 | 第15-16页 |
| 1.2.1 SA14-14-2简介 | 第15页 |
| 1.2.2 JEV-DENV2嵌合病毒疫苗 | 第15-16页 |
| 1.2.3 JEV-TBEV嵌合病毒疫苗 | 第16页 |
| 1.2.4 JEV-DENV4嵌合病毒疫苗 | 第16页 |
| 1.3 病毒疫苗研究概况 | 第16-18页 |
| 1.3.1 病毒减毒活疫苗 | 第16-17页 |
| 1.3.2 病毒灭活疫苗 | 第17页 |
| 1.3.3 病毒基因工程亚单位疫苗 | 第17页 |
| 1.3.4 病毒嵌合疫苗 | 第17页 |
| 1.3.5 病毒合成肽疫苗 | 第17-18页 |
| 1.3.6 病毒核酸疫苗 | 第18页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 实验材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 病毒 | 第19页 |
| 2.1.2 质粒 | 第19页 |
| 2.1.3 细胞 | 第19页 |
| 2.1.4 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.5 培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.6 试剂 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-31页 |
| 2.2.1 YFV prME基因的钓取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 融合PCR获得JEV-YFV嵌合基因片段 | 第21页 |
| 2.2.3 双质粒系统构建JEV/YFV嵌合型cDNA | 第21页 |
| 2.2.4 转染 | 第21-22页 |
| 2.2.5 JEV-YFV嵌合型拯救病毒的鉴定 | 第22-27页 |
| 2.2.5.1 噬斑试验 | 第22页 |
| 2.2.5.2 拯救病毒的基因组序列鉴定 | 第22-25页 |
| 2.2.5.3 拯救病毒的放大培养和传代 | 第25页 |
| 2.2.5.4 间接免疫荧光 | 第25-26页 |
| 2.2.5.5 IHC试验 | 第26页 |
| 2.2.5.6 流式细胞仪检测拯救病毒 | 第26页 |
| 2.2.5.7 Western blot | 第26-27页 |
| 2.2.5.8 拯救病毒生长曲线的绘制 | 第27页 |
| 2.2.6 拯救病毒的体内活性鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.6.1 rYJ在戒奶小鼠体内神经外毒性检测 | 第27页 |
| 2.2.6.2 rYJ在乳鼠体内神经内毒性检测 | 第27页 |
| 2.2.6.3 rYJ在戒奶小鼠体内神经内毒性检测 | 第27页 |
| 2.2.6.4 拯救病毒戒奶小鼠脑内LD_(50)检测 | 第27-28页 |
| 2.2.6.5 拯救病毒小鼠免疫试验 | 第28页 |
| 2.2.7 血清中特异性抗体鉴定 | 第28页 |
| 2.2.7.1 间接ELISA试验 | 第28页 |
| 2.2.7.2 50%噬斑减少试验 | 第28页 |
| 2.2.8 病毒血症检测 | 第28-29页 |
| 2.2.9 小鼠细胞免疫试验 | 第29页 |
| 2.2.9.1 脾细胞悬液的制备 | 第29页 |
| 2.2.9.2 细胞因子IFN-γ检测 | 第29页 |
| 2.2.10 小鼠攻毒试验 | 第29-30页 |
| 2.2.11 统计学分析 | 第30-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-46页 |
| 3.1 应用DNA-based双质粒系统构建JEV和YFV的嵌合cDNA | 第31-34页 |
| 3.1.1 构建策略 | 第31-33页 |
| 3.1.2 重组嵌合cDNA鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2 嵌合重组病毒的鉴定 | 第34-41页 |
| 3.2.1 获得嵌合重组病毒 | 第34-35页 |
| 3.2.2 重组病毒的序列测定 | 第35-36页 |
| 3.2.3 IHC | 第36-37页 |
| 3.2.4 间接免疫荧光试验 | 第37-38页 |
| 3.2.5 Western blot | 第38页 |
| 3.2.6 流式细胞仪检测拯救病毒 | 第38-39页 |
| 3.2.7 生长曲线 | 第39-41页 |
| 3.3 重组嵌合病毒神经毒性检测与免疫原性试验 | 第41-46页 |
| 3.3.1 rYJ神经外毒性试验 | 第41页 |
| 3.3.2 rYJ神经内毒性试验 | 第41-42页 |
| 3.3.3 病毒血症 | 第42-43页 |
| 3.3.4 免疫小鼠YFV抗体的检测 | 第43页 |
| 3.3.5 细胞免疫试验 | 第43-44页 |
| 3.3.6 攻毒试验 | 第44-46页 |
| 4 讨论与结论 | 第46-50页 |
| 4.1 讨论 | 第46-49页 |
| 4.2 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
