| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 花生在国民经济中的地位 | 第13-14页 |
| 1.2 植物的抗逆性 | 第14-17页 |
| 1.3 ABA与逆境胁迫 | 第17-19页 |
| 1.4 ABA相关的抗逆基因工程 | 第19-21页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-39页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第23页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-38页 |
| 2.2.1 花生培养与胁迫处理 | 第24页 |
| 2.2.2 花生抗旱性鉴定 | 第24页 |
| 2.2.3 叶片萎蔫指数的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.4 植物组织总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.5 反转录cDNA第一链合成 | 第25-26页 |
| 2.2.6 cDNA纯化 | 第26页 |
| 2.2.7 PCR反应扩增目的片段 | 第26-27页 |
| 2.2.8 连接反应 | 第27页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态细胞制备和转化 | 第27-28页 |
| 2.2.9.1 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第27页 |
| 2.2.9.2 目的片段转化大肠杆菌感受态细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.10 小量碱法提取质粒DNA | 第28-29页 |
| 2.2.11 DNA序列测定 | 第29-30页 |
| 2.2.11.1 酶切连接到植物表达载体 | 第29页 |
| 2.2.11.2 感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.11.3 农杆菌的冻融法转化 | 第30页 |
| 2.2.12 农杆菌介导的烟草转化 | 第30-32页 |
| 2.2.12.1 培养农杆菌 | 第30页 |
| 2.2.12.2 农杆菌介导的烟草转化 | 第30-31页 |
| 2.2.12.3 转基因植株的筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.12.4 转基因植株的PCR检测 | 第32页 |
| 2.2.13 Northern Blot检测 | 第32-34页 |
| 2.2.13.1 烟草RNA的变性凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.2.13.2 RNA转膜 | 第33页 |
| 2.2.13.3 合成Northern blot探针 | 第33-34页 |
| 2.2.13.4 预杂交及杂交 | 第34页 |
| 2.2.14 叶绿素含量测定 | 第34页 |
| 2.2.15 胁迫状态下相对含水量（RWC）测定 | 第34页 |
| 2.2.16 丙二醛含量（MDA）测定 | 第34-35页 |
| 2.2.17 抗氧化酶（APX，POD，SOD，CAT）测定 | 第35-37页 |
| 2.2.17.1 抗坏血酸过氧化物酶（APX）测定 | 第35页 |
| 2.2.17.2 超氧化物歧化酶（SOD）测定 | 第35-36页 |
| 2.2.17.3 过氧化物酶含量（POD）测定 | 第36页 |
| 2.2.17.4 过氧化氢酶（CAT）测定 | 第36-37页 |
| 2.2.17.5 抗氧化物质（GSH和ASA）含量的测定 | 第37页 |
| 2.2.18 渗透调节物质脯氨酸（Proline）含量测定 | 第37-38页 |
| 2.2.19 内源ABA含量测定 | 第38页 |
| 2.3 数据统计分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-66页 |
| 3.1 花生AhLOS5的克隆及序列分析 | 第39-45页 |
| 3.1.1 花生总RNA的提取及逆转录 | 第39页 |
| 3.1.2 花生AhLOS5基因中间片段的克隆与测序 | 第39-40页 |
| 3.1.3 花生AhLOS5基因 3′端的克隆与测序 | 第40页 |
| 3.1.4 花生AhLOS5基因 5′端的克隆与测序 | 第40-41页 |
| 3.1.5 花生AhLOS5基因全长cDNA序列的获得 | 第41-45页 |
| 3.2 花生AhLOS5基因表达分析 | 第45-49页 |
| 3.2.1 花生AhLOS5基因表达时空特征 | 第45-49页 |
| 3.2.1.1 AhLOS5基因在花生各组织的表达特征 | 第45页 |
| 3.2.1.2 AhLOS5基因在花生叶片不同发育时期的表达特征 | 第45-46页 |
| 3.2.1.3 AhLOS5基因表达受多种胁迫诱导 | 第46-47页 |
| 3.2.1.4 AhLOS5基因表达与花生抗旱性关系 | 第47-49页 |
| 3.3 花生AhLOS5转化烟草研究 | 第49-66页 |
| 3.3.1 植物表达载体的构建 | 第49-51页 |
| 3.3.2 根癌农杆菌的转化 | 第51-52页 |
| 3.3.3 再生植株的获得 | 第52页 |
| 3.3.4 T0代转基因植株的鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.4.1 转基因植株的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.4.2 转基因植株的Northern blot | 第53页 |
| 3.3.5 T1代转基因植株的鉴定及转基因的分离 | 第53-55页 |
| 3.3.6 转基因植株耐旱性检测 | 第55-60页 |
| 3.3.6.1 过表达AhLOS5的转基因植株耐旱性明显高于WT和反义转基因植株 | 第55-56页 |
| 3.3.6.2 过表达AhLOS5转基因植株耐旱机制研究 | 第56-60页 |
| 3.3.7 转基因植株耐盐性检测 | 第60-64页 |
| 3.3.7.1 过表达AhLOS5的转基因植株耐盐性明显高于WT和反义转基因植株 | 第60-61页 |
| 3.3.7.2 过表达AhLOS5转基因植株耐盐机制研究 | 第61-64页 |
| 3.3.8 干旱及盐胁迫相关调控基因的表达分析 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间获得成果情况 | 第83页 |
