| 摘要 | 第10-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 缩略语表 | 第19-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-45页 |
| 第一节 甲壳动物的性别决定机制 | 第22-26页 |
| 1 性染色体与性别决定 | 第22-23页 |
| 2 内分泌器官与性别决定 | 第23-24页 |
| 2.1 促雄腺 | 第23页 |
| 2.2 X-器官-窦腺复合体 | 第23-24页 |
| 3 参与性别决定的相关基因 | 第24-25页 |
| 4 环境因子与性别决定 | 第25-26页 |
| 第二节 促雄腺及IAG基因的研究进展 | 第26-33页 |
| 1 促雄腺的研究进展 | 第26-29页 |
| 1.1 促雄腺的位置、形状及生理构造 | 第26-27页 |
| 1.2 促雄腺在甲壳动物的移植和摘除研究 | 第27-29页 |
| 2 IAG基因的研究进展 | 第29-33页 |
| 2.1 IAG激素的性质 | 第29-30页 |
| 2.2 IAG基因功能的研究 | 第30-31页 |
| 2.3 单性化养殖的技术路线及前景 | 第31-33页 |
| 第三节 X-器官-窦腺复合体及CHH家族神经激素基因的研究进展 | 第33-38页 |
| 1 X-器官-窦腺复合体 | 第33页 |
| 2 XO-SG复合体分泌的激素 | 第33-34页 |
| 3 性腺抑制激素基因的研究进展 | 第34-36页 |
| 4 蜕皮抑制激素基因的研究进展 | 第36-37页 |
| 5 高血糖素基因的研究进展 | 第37-38页 |
| 第四节 RNA干扰在水生生物的应用研究 | 第38-43页 |
| 1 RNAi简介 | 第38页 |
| 2 RNAi在水生生物体节发育、代谢方面的研究 | 第38-39页 |
| 3 RNAi在水生生物神经激素方面的研究 | 第39-40页 |
| 4 RNAi在水生生物受体基因方面的研究 | 第40-41页 |
| 5 RNAi在水生生物性别控制方面的研究 | 第41页 |
| 6 RNAi在水生生物免疫系统方面的研究 | 第41-43页 |
| 第五节 本研究的目的、意义及整体思路 | 第43-45页 |
| 第二章 青虾IAG和IAGBP基因的克隆及在发育过程和成体组织中的表达分析 | 第45-85页 |
| 第一节 青虾IAG基因cDNA和基因组序列的克隆及分析 | 第45-65页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| 1.1 实验用虾 | 第45-46页 |
| 1.2 试剂 | 第46页 |
| 1.3 仪器 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-54页 |
| 2.1 青虾促雄腺组织总RNA的提取 | 第46-47页 |
| 2.1.1 实验用品的预处理 | 第46-47页 |
| 2.1.2 促雄腺组织总RNA的提取 | 第47页 |
| 2.1.3 总RNA的浓度测定和质量检测 | 第47页 |
| 2.2 青虾促雄腺总RNA第一链cDNA的合成 | 第47页 |
| 2.3 青虾IAG基因中间片段的PCR扩增 | 第47-48页 |
| 2.4 青虾IAG基因中间片段的克隆测序 | 第48-49页 |
| 2.4.1 扩增产物切胶纯化 | 第48页 |
| 2.4.2 载体连接 | 第48-49页 |
| 2.4.3 产物转化及阳性克隆筛选 | 第49页 |
| 2.5 青虾IAG基因cDNA序列的获得 | 第49-52页 |
| 2.5.1 青虾IAG基因3'端扩增 | 第49-50页 |
| 2.5.2 青虾IAG基因5'端扩增 | 第50-52页 |
| 2.6 青虾IAG基因组序列的获得 | 第52-53页 |
| 2.6.1 青虾基因组DNA的提取 | 第52页 |
| 2.6.2 青虾基因组DNA的处理 | 第52页 |
| 2.6.3 青虾IAG基因组步移PCR扩增反应 | 第52-53页 |
| 2.7 青虾IAG基因组序列的验证 | 第53页 |
| 2.8 生物信息学分析 | 第53-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-62页 |
| 3.1 青虾IAG基因cDNA序列的结构特征 | 第54-56页 |
| 3.2 青虾IAG氨基酸序列分析 | 第56-59页 |
| 3.3 青虾IAG基因组序列的结构特征 | 第59-61页 |
| 3.4 青虾IAG基因5'侧翼序列分析 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| 第二节 青虾IAGBP基因cDNA和基因组序列的克隆及分析 | 第65-77页 |
| 1 材料 | 第65页 |
| 1.1 实验用虾 | 第65页 |
| 1.2 试剂 | 第65页 |
| 1.3 仪器 | 第65页 |
| 2 方法 | 第65-68页 |
| 2.1 青虾促雄腺组织总RNA的提取 | 第65-66页 |
| 2.2 青虾促雄腺组织总RNA第一链cDNA的合成 | 第66页 |
| 2.3 青虾IAGBP基因中间片段的获得 | 第66-67页 |
| 2.4 青虾IAGBP基因cDNA序列的获得 | 第67页 |
| 2.4.1 青虾IAGBP基因3'端扩增 | 第67页 |
| 2.4.2 青虾IAGBP基因5'端扩增 | 第67页 |
| 2.5 青虾IAGBP基因组序列的获得 | 第67-68页 |
| 2.6 青虾IAGBP基因组序列的验证 | 第68页 |
| 2.7 生物信息学分析 | 第68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-76页 |
| 3.1 青虾IAGBP基因cDNA序列的结构特征 | 第68-70页 |
| 3.2 青虾IAGBP氨基酸序列分析 | 第70-74页 |
| 3.3 青虾IAGBP基因组序列的结构特征 | 第74-76页 |
| 4 讨论 | 第76-77页 |
| 第三节 青虾IAG和IAGBP基因在成体组织和发育过程中的表达分析 | 第77-85页 |
| 1 材料 | 第77-78页 |
| 1.1 实验用虾 | 第77页 |
| 1.2 试剂 | 第77页 |
| 1.3 仪器 | 第77-78页 |
| 2 方法 | 第78-80页 |
| 2.1 青虾成体组织样品的采集 | 第78页 |
| 2.2 青虾不同发育时期样品的采集 | 第78页 |
| 2.3 青虾成体组织和不同发育时期RNA的提取 | 第78页 |
| 2.4 青虾成体组织和不同发育时期总RNA第一链cDNA的合成 | 第78页 |
| 2.5 青虾IAG和IAGBP基因在成体组织和发育时期的表达分析 | 第78-80页 |
| 2.5.1 引物设计及检验 | 第78-79页 |
| 2.5.2 荧光定量PCR扩增 | 第79-80页 |
| 2.5.3 数据分析 | 第80页 |
| 3 结果 | 第80-83页 |
| 3.1 青虾各样品总RNA的检测 | 第80-81页 |
| 3.2 青虾IAG基因在成体不同组织中的表达分析 | 第81页 |
| 3.3 青虾IAGBP基因在成体不同组织中的表达分析 | 第81-82页 |
| 3.4 青虾IAG基因在不同发育时期的表达分析 | 第82页 |
| 3.5 青虾IAGBP基因在不同发育时期的表达分析 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-85页 |
| 第三章 青虾IAG与IAGBP基因相互调控关系的研究 | 第85-93页 |
| 1 材料 | 第85-86页 |
| 1.1 实验用虾 | 第85页 |
| 1.2 试剂 | 第85-86页 |
| 1.3 仪器 | 第86页 |
| 2 方法 | 第86-90页 |
| 2.1 青虾IAG和IAGBP基因的干扰实验 | 第86-88页 |
| 2.1.1 青虾IAG和IAGBP基因dsRNA的引物设计 | 第86-87页 |
| 2.1.2 青虾IAG和IAGBP基因干扰片段的扩增 | 第87页 |
| 2.1.3 青虾IAG和IAGBP基因dsRNA的制备 | 第87-88页 |
| 2.1.4 dsRNA的质量检测和浓度测定 | 第88页 |
| 2.1.5 青虾IAG和IAGBP基因的干扰实验 | 第88页 |
| 2.2 青虾实验组织总RNA的提取 | 第88-89页 |
| 2.3 青虾实验组织总RNA第一链cDNA的合成 | 第89页 |
| 2.4 青虾RNA干扰实验的荧光定量PCR扩增 | 第89页 |
| 2.5 数据分析 | 第89-90页 |
| 3 结果 | 第90-91页 |
| 4 讨论 | 第91-93页 |
| 第四章 青虾CHH家族神经激素基因对IAG基因调控作用的研究 | 第93-105页 |
| 1 材料 | 第94页 |
| 1.1 实验用虾 | 第94页 |
| 1.2 试剂 | 第94页 |
| 1.3 仪器 | 第94页 |
| 2 方法 | 第94-98页 |
| 2.1 GIH,MIH和CHH基因组序列的获得 | 第94页 |
| 2.2 GIH,MIH和CHH基因组序列的验证 | 第94页 |
| 2.3 GIH,MIH和CHH激素的生物信息学分析 | 第94-95页 |
| 2.4 单侧及双侧眼柄剪除实验 | 第95-96页 |
| 2.5 GIH,MIH和CHH基因的RNA干扰实验 | 第96-97页 |
| 2.6 荧光定量PCR扩增 | 第97-98页 |
| 2.7 数据分析 | 第98页 |
| 3 结果 | 第98-101页 |
| 4 讨论 | 第101-105页 |
| 第五章 青虾IAG基因组序列中与生长相关的SNP位点分析 | 第105-113页 |
| 1 材料 | 第105-106页 |
| 1.1 实验用虾 | 第105-106页 |
| 1.2 试剂 | 第106页 |
| 1.3 仪器 | 第106页 |
| 2 方法 | 第106-108页 |
| 2.1 青虾DNA的提取 | 第106页 |
| 2.2 青虾IAG基因组中SNP位点的筛选 | 第106-107页 |
| 2.3 SNP位点遗传学参数及与生长相关性分析 | 第107-108页 |
| 3 结果 | 第108-111页 |
| 3.1 青虾IAG基因组中SNP位点鉴定 | 第108-109页 |
| 3.2 四个SNP位点的遗传参数及与生长相关性分析 | 第109页 |
| 3.3 四个SNP位点连锁不平衡和单倍型分析 | 第109-111页 |
| 4 讨论 | 第111-113页 |
| 全文结论 | 第113-115页 |
| 创新点 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-141页 |
| 附录 | 第141-157页 |
| 致谢 | 第157-159页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第159页 |
