摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
一、文献综述 | 第12-34页 |
1 植物逆境概述 | 第12-18页 |
1.1 逆境胁迫 | 第12-15页 |
1.1.1 高温胁迫的影响 | 第14页 |
1.1.2 其它逆境胁迫的影响 | 第14-15页 |
1.2 植物抗逆机制 | 第15-18页 |
1.2.1 依赖于ABA介导的信号途径 | 第15-16页 |
1.2.2 不依赖于ABA介导的信号途径 | 第16页 |
1.2.3 逆境信号通路间的网络联系 | 第16-18页 |
2 热激蛋白研究进展 | 第18-24页 |
2.1 热激蛋白的发现 | 第18页 |
2.2 热激蛋白的分类 | 第18-19页 |
2.3 热激蛋白的表达调控 | 第19-20页 |
2.4 热激蛋白的主要功能 | 第20-23页 |
2.4.1 热激蛋白介导细胞凋亡 | 第20-21页 |
2.4.2 热激蛋白的分子伴侣作用 | 第21-22页 |
2.4.3 热激蛋白与植物的抗逆性 | 第22-23页 |
2.5 热激蛋白的应用 | 第23-24页 |
3. HSP90家族研究进展 | 第24-32页 |
3.1 HSP90的结构及类型 | 第25-28页 |
3.1.1 HSP90的结构 | 第25-27页 |
3.1.2 HSP90的类型 | 第27-28页 |
3.2 HSP90与其它蛋白的相互作用及它们相互作用的机制 | 第28-29页 |
3.2.1 辅助蛋白 | 第28-29页 |
3.2.2 调节因子 | 第29页 |
3.2.3 底物蛋白 | 第29页 |
3.3 HSP90的功能 | 第29-32页 |
3.3.1 HSP90的分子伴侣作用 | 第30页 |
3.3.2 HSP90的抗肿瘤作用 | 第30页 |
3.3.3 HSP90参与调控细胞周期 | 第30页 |
3.3.4 HSP90参与调控细胞骨架动力学 | 第30-31页 |
3.3.5 HSP90参与植物抗逆性 | 第31-32页 |
3.3.5.1 HSP90参与抗病虫害 | 第31页 |
3.3.5.2 HSP90介导非生物逆境抗性 | 第31-32页 |
4 本研究的目的和意义 | 第32-34页 |
二、材料与方法 | 第34-48页 |
1. 材料 | 第34-37页 |
1.1 植物材料 | 第34页 |
1.2 菌株和质粒 | 第34-35页 |
1.3 主要仪器 | 第35页 |
1.4 主要试剂 | 第35-36页 |
1.5 主要培养基 | 第36-37页 |
2. 方法 | 第37-48页 |
2.1 数据库搜索 | 第37-38页 |
2.2 HSP90家族基因和HSP90家族蛋白结构的分析 | 第38页 |
2.3 水稻材料的处理 | 第38-39页 |
2.3.1 大田水稻材料的采集 | 第38页 |
2.3.2 逆境处理水稻材料的采集 | 第38-39页 |
2.4 RNA的提取 | 第39页 |
2.5 荧光定量PCR | 第39-41页 |
2.5.1 cDNA第一链的合成 | 第39页 |
2.5.2 qRT-PCR | 第39-41页 |
2.6 转化OsHSP90-2的大肠杆菌的抗逆测试 | 第41-42页 |
2.6.1 pET-32a:OsHSP90-2载体的构建 | 第41页 |
2.6.1.1 目的基因OsHSP90-2的克隆 | 第41页 |
2.6.1.2 pET-32a空载体的制备 | 第41页 |
2.6.2 pET32a-OsHSP90-2大肠杆菌的制备 | 第41-42页 |
2.6.3 大肠杆菌的逆境处理 | 第42页 |
2.7 转化OsHSP90-4的大肠杆菌的抗逆测试 | 第42页 |
2.8 OsHSP90-4水稻转化子的抗逆测试 | 第42-48页 |
2.8.1 pCAMBIA1300:OsHSP90-4超表达载体的构建 | 第42-43页 |
2.8.2 转化农杆菌的制备 | 第43-44页 |
2.8.2.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第43页 |
2.8.2.2 农杆菌的转化 | 第43-44页 |
2.8.3 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第44-45页 |
2.8.3.1 愈伤组织的诱导 | 第44页 |
2.8.3.2 农杆菌菌株的活化 | 第44页 |
2.8.3.3 共培养转化 | 第44页 |
2.8.3.4 抗性愈伤组织的筛选 | 第44页 |
2.8.3.5 转基因植株的分化与生根 | 第44-45页 |
2.8.4 转基因植株的分子生物学检测 | 第45页 |
2.8.4.1 微量法简易提取植物基因组DNA | 第45页 |
2.8.4.2 转化植株的PCR检测 | 第45页 |
2.8.5 转基因植株的抗逆测试 | 第45-46页 |
2.8.5.1 幼苗的制备 | 第45页 |
2.8.5.2 RNA的提取 | 第45页 |
2.8.5.3 转基因植株的荧光定量PCR | 第45页 |
2.8.5.4 转基因植株的高温胁迫的处理 | 第45-46页 |
2.8.5.5 转基因植株对ABA敏感性的测试 | 第46页 |
2.8.5.6 转基因植株清除活性氧相关基因表达量的荧光定量PCR | 第46页 |
2.8.6 转基因植株的相对产量的考察 | 第46-48页 |
三、结果与分析 | 第48-68页 |
1. HSP90基因家族成员序列分析 | 第48-52页 |
1.1 HSP90家族成员的鉴别 | 第48-49页 |
1.2 OsHSP90家族成员的序列分析 | 第49-52页 |
2. 进化树分析 | 第52-53页 |
3. OsHSP90家族基因的时空表达 | 第53-55页 |
4. 水稻OsHSP90家族基因在逆境条件下的表达谱 | 第55-57页 |
5. OsHSP90-2增强大肠杆菌非生物胁迫抗性 | 第57-59页 |
6. OsHSP90-4增强大肠杆菌非生物胁迫抗性 | 第59-61页 |
7. OsHSP90-4转基因水稻的测试 | 第61-68页 |
7.1 OsHSP90-4转基因水稻的逆境测试 | 第61-67页 |
7.1.1 OsHSP90-4的过量表达增强了水稻热耐受性 | 第61-63页 |
7.1.2 OsHSP90-4的过量表达提高了对ABA的敏感性 | 第63-64页 |
7.1.3 OsHSP90-4的过量表达增强清除活性氧相关基因的表达 | 第64-67页 |
7.2 OsHSP90-4转基因水稻的相对产量考察 | 第67-68页 |
四、讨论 | 第68-71页 |
1 OsHSP90各成员与逆境的关系 | 第68页 |
2 OsHSP90-4增强水稻热耐受性原因 | 第68-69页 |
3 OsHSP90-2能增强大肠杆菌非生物胁迫抗性,但不能增强水稻热耐受性的原因 | 第69-71页 |
五、小结 | 第71-72页 |
参考文献 | 第72-87页 |
致谢 | 第87-88页 |