| 中英文缩略词表 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 1. 引言 | 第16-20页 |
| 2. 实验材料 | 第20-25页 |
| ·细胞株 | 第20页 |
| ·质粒 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-22页 |
| ·主要仪器和设备 | 第22-23页 |
| ·主要溶液及试剂配制 | 第23-25页 |
| ·常规试剂 | 第23-24页 |
| ·DNA分析试剂 | 第24页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第24页 |
| ·细菌培养相关试剂 | 第24-25页 |
| 3. 实验方法 | 第25-38页 |
| ·MERS-CoV 3CLpro及其突变体的构建 | 第25-27页 |
| ·设计引物 | 第25页 |
| ·定点突变PCR | 第25-26页 |
| ·PCR产物回收后消化酶切 | 第26-27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·测序鉴定 | 第27页 |
| ·pGlo-30F-Substrates的构建 | 第27-31页 |
| ·蛋白酶识别位点碱基序列合成 | 第27-28页 |
| ·寡核苷酸序列稀释和退火 | 第28-29页 |
| ·pGlo-30F-RLKGG双酶切 | 第29-30页 |
| ·载体脱磷酸化 | 第30页 |
| ·连接 | 第30页 |
| ·转化 | 第30-31页 |
| ·测序鉴定 | 第31页 |
| ·pGlo-30F-Substrates识别位点突变体的构建 | 第31-34页 |
| ·设计引物 | 第31-32页 |
| ·点突变PCR | 第32-33页 |
| ·PCR产物回收后Dpn I消化酶切 | 第33-34页 |
| ·转化 | 第34页 |
| ·测序鉴定 | 第34页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测MERS PLpro/3CLpro及其突变体活性 | 第34-36页 |
| ·铺板 | 第34页 |
| ·转染 | 第34-35页 |
| ·收集细胞 | 第35-36页 |
| ·Western blotting分析蛋白表达量 | 第36-38页 |
| ·统计学分析 | 第38页 |
| 4. 结果 | 第38-55页 |
| ·MERS-CoV基因组结构和蛋白酶及其识别位点 | 第38-39页 |
| ·生物传感器模型的原理及相关寡核苷酸的合成 | 第39-40页 |
| ·基于生物传感器的MERS-CoV PLpro蛋白酶活性测定模型建立 | 第40-44页 |
| ·MERS-CoV PLpro蛋白酶活性检测模型建立 | 第40-42页 |
| ·MERS PLpro蛋白酶催化位点鉴定 | 第42-43页 |
| ·MERS PLpro蛋白酶识别位点对生物传感器的影响 | 第43-44页 |
| ·应用PLpro生物传感器比较不同冠状病毒PLP蛋白酶活性 | 第44-47页 |
| ·比较MERS和SARS PLpro蛋白酶活性 | 第44-47页 |
| ·基于生物传感器的MERS-CoV 3CLpro蛋白酶活性检测模型 | 第47-51页 |
| ·MERS 3CLpro蛋白酶活性检测模型的建立 | 第47-48页 |
| ·MERS 3CLpro蛋白酶催化位点鉴定 | 第48-50页 |
| ·MERS 3CLpro蛋白酶识别位点对生物传感器活性的影响 | 第50-51页 |
| ·比较MERS和SARS 3CLpro蛋白酶活性的差异 | 第51-54页 |
| ·Cinaserin能够抑制多种冠状病毒 3CLpro蛋白酶活性 | 第54-55页 |
| 5. 讨论 | 第55-57页 |
| 6. 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 个人简历 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 综述 | 第69-85页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
