| 缩略语 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 第一部分 利用CRISPR/Cas9技术构建Drosha基因稳定敲除细胞株 | 第13-31页 |
| 1 前言 | 第13-14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-25页 |
| ·实验材料 | 第14-16页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14-15页 |
| ·主要溶液配制 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15-16页 |
| ·引物序列 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-25页 |
| ·构建p Cas-sg RNA载体 | 第16-20页 |
| ·构建供体DNA载体p Back Zero-T-Drosha | 第20-23页 |
| ·细胞转染及稳定细胞株筛选 | 第23-24页 |
| ·Western blot分析鉴定 | 第24-25页 |
| 3 结果 | 第25-29页 |
| ·设计并构建p Cas-sg RNA载体 | 第25页 |
| ·构建供体DNA载体 | 第25-28页 |
| ·筛选鉴定Drosha基因敲除的稳定细胞株 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 5 小结 | 第30-31页 |
| 第二部分 利用CRISPR/Cas9技术构建在XRCC6内源基因插入Flag标签细胞系 | 第31-47页 |
| 1 前言 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-40页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要溶液配制 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·引物序列 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-40页 |
| ·构建p Cas-XRCC6载体 | 第34-36页 |
| ·构建供体DNA载体 | 第36-38页 |
| ·细胞转染及稳定细胞株的初步鉴定 | 第38页 |
| ·稳定株的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| ·免疫共沉淀分析鉴定 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-44页 |
| ·构建p Cas-XRCC6载体和p XRCC6-Donor载体 | 第40-41页 |
| ·稳定细胞株XRCC6-Flag筛选与鉴定 | 第41-43页 |
| ·稳定细胞株XRCC6-Flag免疫沉淀分析鉴定 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 5 小结 | 第45-47页 |
| 第三部分 利用CRISPR/Cas9技术构建RNase L基因稳定敲除细胞株及RNase L功能初步研究 | 第47-64页 |
| 1 前言 | 第47-48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-55页 |
| ·实验材料 | 第48-50页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要溶液配制 | 第48-49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·引物序列 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-55页 |
| ·构建p Cas-sg RNA载体 | 第50-51页 |
| ·构建供体DNA载体 | 第51-53页 |
| ·细胞转染及稳定细胞株筛选 | 第53页 |
| ·Western blot分析鉴定 | 第53-54页 |
| ·RNase L敲除细胞株基因组融合位点测序 | 第54页 |
| ·CCK8法细胞增殖检测 | 第54-55页 |
| ·RNase L敲除细胞周期检测 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-62页 |
| ·设计并构建p Cas-sg RNA载体 | 第55-56页 |
| ·构建供体DNA载体 | 第56-59页 |
| ·筛选鉴定RNase L敲除的稳定细胞株 | 第59页 |
| ·在基因组水平上鉴定RNase L敲除的稳定细胞株 | 第59-60页 |
| ·敲除RNase L促进细胞增殖 | 第60-61页 |
| ·流式细胞术检测RNase L对HEK293细胞周期的影响 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 5 小结 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录1 主要溶液配制 | 第73-75页 |
| 附录2 个人简历 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 综述 | 第79-89页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
